去勢后阻斷自噬對(duì)大鼠前列腺細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的:
　　1.觀察細(xì)胞自噬在去勢后大鼠前列腺組織中的變化;
　　2.探討阻斷自噬對(duì)去勢后對(duì)大鼠前列腺細(xì)胞凋亡的影響。
　　方法:
　　將72只3～5個(gè)月齡SD雄性大鼠隨機(jī)分為假切對(duì)照組（即假切組）、去勢組、去勢+硫酸羥氯喹處理組（即羥氯喹組），每組24只。假切組:以7％水合氯醛(5ml/kg)腹腔注射麻醉，取陰囊正中切口，僅分離出睪丸附睪組織后，即依次關(guān)閉切口;去勢組:麻醉和切口同上，完整取出雙側(cè)睪丸附睪組織后

2、依次關(guān)閉切口;羥氯喹組:手術(shù)方法同去勢組，再硫酸羥氯喹片40mg/kg.d灌服。各組大鼠分別于術(shù)后第1、3、7、10、14、21天隨機(jī)抽取4只，完整取出前列腺組織。1.HE染色光鏡下對(duì)比觀察3組大鼠前列腺組織形態(tài)學(xué)變化;2.透射電鏡下觀察3組大鼠前列腺細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，自噬小體和凋亡小體的變化;3.免疫組化SP法檢測自噬受體蛋白P62及凋亡促進(jìn)蛋白Caspase-3在3組大鼠前列腺組織中的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.光鏡下假切

3、組大鼠前列腺腺上皮細(xì)胞呈高柱狀，核位于基底部，腺泡形態(tài)正常，腺腔內(nèi)較多分泌液。去勢早期（術(shù)后1-3天）可見大鼠前列腺腺體數(shù)量減少，間質(zhì)輕度增生，腺上皮細(xì)胞輕度萎縮，呈低柱狀，核染色加深，腺泡形態(tài)基本正常，腺腔內(nèi)分泌液減少。同期羥氯喹組大鼠前列腺腺上皮細(xì)胞中度萎縮，核漿比增大，間質(zhì)纖維組織和平滑肌增生，腺泡萎縮變小。去勢中晚期（術(shù)后7-21天）可見大鼠前列腺上皮細(xì)胞萎縮更加明顯，呈立方或扁平狀，核深染，腺腔明顯變小甚至閉塞，腔內(nèi)分泌液明顯

4、減少，間質(zhì)明顯增生，至去勢后第21天可見部分腺體呈實(shí)性，腺泡解體。同期羥氯喹組可見大鼠前列腺上皮細(xì)胞重度萎縮，出現(xiàn)小暗細(xì)胞，核濃染，腺腔閉塞，間質(zhì)出現(xiàn)少量炎癥細(xì)胞浸潤，平滑肌明顯增生。
　　2.電鏡下假切組大鼠前列腺細(xì)胞中各細(xì)胞器結(jié)構(gòu)完整，幾乎沒有自噬小體出現(xiàn)。去勢后大鼠前列腺細(xì)胞見有大量空泡狀雙層膜樣結(jié)構(gòu)自噬小體形成，有的與自噬溶酶體結(jié)合，消化腔內(nèi)的細(xì)胞器。同時(shí)可見大鼠前列腺上皮細(xì)胞出現(xiàn)典型的凋亡現(xiàn)象，及凋亡小體形成。
　

5、　3.與假切對(duì)照組相比，去勢后P62蛋白表達(dá)減弱，加用硫酸羥氯喹處理后表達(dá)較去勢組增強(qiáng)，且以術(shù)后第14天最為明顯，與其余各組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。去勢后前列腺組織中Caspase-3表達(dá)較對(duì)照組明顯增強(qiáng)。加用硫酸羥氯喹處理后Caspase-3表達(dá)進(jìn)一步增強(qiáng)，以術(shù)后第10、14天最為明顯，與其余各組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。在羥氯喹組中P62和Caspase-3蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.824，P＜0.05)，