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文檔簡介
1、目的:
1.觀察細胞自噬在去勢后大鼠前列腺組織中的變化;
2.探討阻斷自噬對去勢后對大鼠前列腺細胞凋亡的影響。
方法:
將72只3~5個月齡SD雄性大鼠隨機分為假切對照組(即假切組)、去勢組、去勢+硫酸羥氯喹處理組(即羥氯喹組),每組24只。假切組:以7%水合氯醛(5ml/kg)腹腔注射麻醉,取陰囊正中切口,僅分離出睪丸附睪組織后,即依次關閉切口;去勢組:麻醉和切口同上,完整取出雙側睪丸附睪組織后
2、依次關閉切口;羥氯喹組:手術方法同去勢組,再硫酸羥氯喹片40mg/kg.d灌服。各組大鼠分別于術后第1、3、7、10、14、21天隨機抽取4只,完整取出前列腺組織。1.HE染色光鏡下對比觀察3組大鼠前列腺組織形態(tài)學變化;2.透射電鏡下觀察3組大鼠前列腺細胞的超微結構,自噬小體和凋亡小體的變化;3.免疫組化SP法檢測自噬受體蛋白P62及凋亡促進蛋白Caspase-3在3組大鼠前列腺組織中的表達。
結果:
1.光鏡下假切
3、組大鼠前列腺腺上皮細胞呈高柱狀,核位于基底部,腺泡形態(tài)正常,腺腔內(nèi)較多分泌液。去勢早期(術后1-3天)可見大鼠前列腺腺體數(shù)量減少,間質(zhì)輕度增生,腺上皮細胞輕度萎縮,呈低柱狀,核染色加深,腺泡形態(tài)基本正常,腺腔內(nèi)分泌液減少。同期羥氯喹組大鼠前列腺腺上皮細胞中度萎縮,核漿比增大,間質(zhì)纖維組織和平滑肌增生,腺泡萎縮變小。去勢中晚期(術后7-21天)可見大鼠前列腺上皮細胞萎縮更加明顯,呈立方或扁平狀,核深染,腺腔明顯變小甚至閉塞,腔內(nèi)分泌液明顯
4、減少,間質(zhì)明顯增生,至去勢后第21天可見部分腺體呈實性,腺泡解體。同期羥氯喹組可見大鼠前列腺上皮細胞重度萎縮,出現(xiàn)小暗細胞,核濃染,腺腔閉塞,間質(zhì)出現(xiàn)少量炎癥細胞浸潤,平滑肌明顯增生。
2.電鏡下假切組大鼠前列腺細胞中各細胞器結構完整,幾乎沒有自噬小體出現(xiàn)。去勢后大鼠前列腺細胞見有大量空泡狀雙層膜樣結構自噬小體形成,有的與自噬溶酶體結合,消化腔內(nèi)的細胞器。同時可見大鼠前列腺上皮細胞出現(xiàn)典型的凋亡現(xiàn)象,及凋亡小體形成。
5、 3.與假切對照組相比,去勢后P62蛋白表達減弱,加用硫酸羥氯喹處理后表達較去勢組增強,且以術后第14天最為明顯,與其余各組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。去勢后前列腺組織中Caspase-3表達較對照組明顯增強。加用硫酸羥氯喹處理后Caspase-3表達進一步增強,以術后第10、14天最為明顯,與其余各組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。在羥氯喹組中P62和Caspase-3蛋白表達呈正相關(r=0.824,P<0.05),
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