CD4+T細胞在銅綠假單胞菌慢性肺部感染免疫損傷中的作用機制研究.pdf

1、背景與目的:
　　 銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa，PA)是臨床上難治性肺部感染的常見病原體，往往引起肺部炎癥遷延，導致組織結構損傷。CD4+T細胞是一類重要的免疫細胞，主要包括T輔助細胞(T helper cell，Th)和調節(jié)性T細胞(Regulatory T cell，Treg)。CD4+T細胞功能失調可以引起炎癥反應異常，但其在PA慢性肺部感染免疫損傷中的作用機制仍不明確。長期低劑量大環(huán)內酯類

2、藥物治療可以有效緩解氣道炎癥，但其對CD4+T細胞的免疫調節(jié)作用尚未見報道。為此，本課題擬從器官水平、細胞水平和分子水平研究CD4+T細胞各亞群在PA慢性肺部感染免疫損傷過程中的作用機制，以及低劑量大環(huán)內酯類藥物相關的免疫調節(jié)機制。
　　 方法:
　　 1、通過BALB/c小鼠氣道接種含有高濃度PA的瓊脂糖珠的方法建立PA慢性肺部感染模型。比較接種高濃度PA瓊脂糖珠懸液（高濃度PA組，109 CFU/ml）、低濃度PA瓊

3、脂糖珠懸液（低濃度PA組，107 CFU/ml）和無菌瓊脂糖珠懸液（對照組）后小鼠的支氣管肺泡灌洗液白細胞計數(shù)、肺組織菌落計數(shù)、病理評分、髓過氧化物酶水平、Th1/Th2/Th17細胞因子和轉錄因子水平。探討Th1/Th2/Th17在PA慢性肺部感染中的功能。
　　 2、以包裹高濃度PA的瓊脂糖珠為PA生物膜模型，比較氣道接種高濃度PA瓊脂糖珠懸液(PA生物膜組，109 CFU/ml)、高濃度游離PA菌液（游離PA組，109 C

4、FU/ml）、無菌瓊脂糖珠懸液和生理鹽水后小鼠的支氣管肺泡灌洗液白細胞計數(shù)、肺組織菌落計數(shù)、病理評分、髓過氧化物酶水平、肺組織CD4+細胞免疫熒光水平、Th1/Th2/Th17/Treg細胞因子和轉錄因子水平、肺組織Foxp3+細胞免疫組化陽性率和脾臟CD4+CD25+Foxp3+細胞流式分析結果。探討PA生物膜對氣道炎癥的影響，及其對Th1/Th2/Th17/Treg細胞功能的作用。
　　 3、小鼠建模后第7d起分別給予低劑量

5、克拉霉素治療和生理鹽水治療。比較克拉霉素治療組、生理鹽水治療組和對照組小鼠的支氣管肺泡灌洗液白細胞計數(shù)、肺組織菌落計數(shù)、病理評分、髓過氧化物酶水平、肺組織CD4+細胞免疫熒光水平、Th1/Th2/Th17/Treg細胞因子和轉錄因子水平。探討低劑量克拉霉素對氣道炎癥和CD4+T細胞功能的作用。
　　 結果:
　　 1、高濃度PA組小鼠的肺部改變符合PA慢性感染的表現(xiàn)。接種后第3d起，高濃度PA組小鼠的支氣管肺泡灌洗液白細

6、胞總數(shù)和中性粒細胞百分比、肺組織病理損傷程度和髓過氧化物酶含量、以及Th1/Th17細胞因子和轉錄因子表達水平均顯著高于低濃度PA組和對照組。兩組小鼠的Th2免疫反應在接種后第5d和第7d沒有顯著差異。
　　 2、與游離PA組相比，PA生物膜組小鼠的肺部PA負荷、中性粒細胞性氣道炎癥水平和肺組織損傷程度顯著提高。接種后第5d和第7d，PA生物膜組小鼠的肺組織CD4+細胞數(shù)量以及Th1/Th17細胞因子和轉錄因子表達水平均顯著高于

7、游離PA組。同時PA生物膜組小鼠的肺組織Foxp3+細胞數(shù)量、Treg細胞因子和轉錄因子表達水平以及脾臟CD4+CD25+Foxp3+細胞數(shù)量均顯著低于游離PA組。
　　 3、克拉霉素治療組小鼠的中性粒細胞性氣道炎癥得到顯著緩解，但肺組織的PA負荷沒有顯著改善?？死顾刂委熃M小鼠的肺組織CD4+細胞數(shù)量、Th1/Th17細胞因子和轉錄因子表達水平以及Foxp3表達水平較生理鹽水治療組顯著降低。
　　 結論: