左氧氟沙星聯(lián)合亞胺培南對銅綠假單胞菌慢性肺部感染免疫低下大鼠抗菌作用及耐藥機制研究.pdf

1、目的:建立銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa，PA)慢性肺部感染合并免疫低下大鼠模型，研究免疫因素對PA治療的影響;探討左氧氟沙星(Levofloxacin，LVF)單獨應(yīng)用、同時與亞胺培南/西司他丁(Imipenem/cilastatin，IPM/CS)聯(lián)合應(yīng)用對PA慢性肺部感染的治療作用，并對相關(guān)耐藥機制進行分析研究。
　　方法:
　　第一部分:銅綠假單胞菌慢性肺部感染合并免疫低下大鼠模型的建立<

2、br>　　應(yīng)用臨床常見的化療藥物環(huán)磷酰胺(Cytoxan，CTX)，以40 mg/kg給藥劑量，連續(xù)三日予以腹腔注射，通過氣管插管法將PA藻酸鹽包被體注入大鼠肺組織，建立肺部感染模型。模型建立后每7日給予大鼠相同劑量的CTX，維持大鼠免疫抑制狀態(tài)。在模型建立期間，固定時間檢測大鼠肺載菌量、肺部病理學變化等指標，同時對外周血血常規(guī)、T細胞亞群等免疫學指標進行檢測。
　　第二部分:左氧氟沙星、亞胺培南單藥及聯(lián)合給藥對銅綠假單胞菌慢性肺

3、部感染免疫力低下大鼠藥效學研究
　　采用第一部分方法，建立銅綠假單胞菌慢性肺部感染免疫低下大鼠模型。將模型組大鼠隨機分為三個實驗組，分別予以LVF45 mg/kg口服灌胃、IPM90 mg/kg腹腔注射、LVF45 mg/kg口服灌胃聯(lián)合IPM90 mg/kg腹腔注射，并設(shè)立對照組。實驗期間，對大鼠肺部病理學、免疫學等指標進行檢測，收集所產(chǎn)生的耐藥菌株。
　　第三部分:銅綠假單胞菌體內(nèi)藥效學耐藥機制研究
　　采用PCR

4、等分析方法，對各組各時間點PA耐藥菌株，對喹諾酮類藥物耐藥決定區(qū)(Quinolone resistance determining region，QRDR)區(qū)域突變位點、質(zhì)粒介導耐藥及OprD2孔道蛋白等指標進行分析。從分子機制角度對體內(nèi)分離PA耐藥株做出進一步分析。
　　結(jié)果:
　　第一部分:銅綠假單胞菌慢性肺部感染合并免疫低下大鼠模型的建立
　　模型建立后，大鼠產(chǎn)生了不同程度的食欲下降、體重減輕、行動力遲緩等癥狀，

5、并有弓背、脫毛、血便、鼻部與眼眶周圍出血結(jié)痂等現(xiàn)象。HE染色結(jié)果顯示，模型組大鼠在造模成功后肺部產(chǎn)生病理學病變，肺組織有較明顯的充血水腫、中性粒細胞聚集等現(xiàn)象。同時，血常規(guī)結(jié)果顯示，模型組白細胞數(shù)目有所下降(p＜0.05)，外周血中性粒細胞有不同程度的增高，T細胞亞群CD4+/CD8+等值有所升高(p＜0.05)。參照國內(nèi)外相關(guān)文獻，判斷模型成功建立。
　　第二部分:左氧氟沙星、亞胺培南單藥及聯(lián)合給藥對銅綠假單胞菌慢性肺部感染免疫

6、力低下大鼠藥效學研究
　　模型組大鼠給藥后，鼻周液體分泌物顯著減少、狀態(tài)有不同程度恢復，肺組織病理呈不同程度的改善。耐藥株分離率大體上隨給藥時間增長而增加，并于給藥后21天達到峰值，停藥后有所降低。與LVF單藥給藥組相比，LVF聯(lián)合IPM給藥組耐藥菌株產(chǎn)生率顯著降低(p＜0.05)，同時治愈率顯著升高(p＜0.05)。
　　第三部分:銅綠假單胞菌體內(nèi)藥效學耐藥機制研究
　　LVF組耐藥菌株中給藥6天后發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒介導耐藥基

7、因QnrA，給藥12天后發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒介導耐藥基因QnrB，同時隨著給藥時間延長，耐藥株質(zhì)粒介導耐藥基因分離頻數(shù)與頻率呈現(xiàn)不同程度的升高，停藥后分離有所下降。IPM給藥組于第6、15天檢測到MBL，聯(lián)合組耐藥株樣本未檢測出MBL陽性;OprD2孔道蛋白缺失是本實驗PA對IPM耐藥的主要因素，通過此部分實驗結(jié)果，聯(lián)合給藥組OprD2基因缺失數(shù)目明顯低于IPM給藥組(P＜0.05)。
　　結(jié)論:參照國內(nèi)外文獻，本實驗成功建立了PA慢性肺部感