低氧誘導(dǎo)因子-1α在小鼠銅綠假單胞菌肺炎中的作用研究.pdf

1、 目的：通過研究低氧誘導(dǎo)因子-1α(Hypoxia inducing factor-1α) 在銅綠假單胞菌肺炎模型小鼠肺組織中的表達(dá)情況,以及探討 HIF-1α與TNF-α、IL-8之間的相關(guān)性,推測(cè)HIF-1α在銅綠假單胞菌肺炎中的可能作用,以期為銅綠假單胞菌肺炎的治療尋找到新思路。方法：1.將鼠齡6~8周、體重25~30g的清潔級(jí)健康雄性昆明小鼠120只按隨機(jī)原則分成肺部感染組(PA組：60只)和正常對(duì)照組(生理鹽水組：60只)。

2、PA組：氯胺酮麻醉小鼠后固定,常規(guī)消毒鋪巾,嚴(yán)格無菌操作,切開頸部皮膚,鈍性分離至皮下組織,暴露上段氣管,經(jīng)氣管內(nèi)穿刺注入銅綠假單胞菌(PA)菌液(2個(gè)麥?zhǔn)蠁挝粷舛取?.03ml)建立小鼠銅綠假單胞菌肺炎模型；正常對(duì)照組：操作同PA組,經(jīng)氣管內(nèi)穿刺注入無菌生理鹽水(0.03ml)作為對(duì)照,兩組均于造模成功后第3、9、24小時(shí)隨機(jī)分別抽取20只小鼠,予以留取標(biāo)本后處死。2.收集各組不同時(shí)間點(diǎn)處死的小鼠血液,離心分離血清后,以酶聯(lián)免疫吸附試

3、驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)檢測(cè)血清中 TNF-α、IL-8 的濃度；取右肺經(jīng) 10%多聚甲醛固定后,切片行HE 染色比較炎癥的范圍及程度,并行免疫組化染色檢測(cè)肺組織中HIF-1α 蛋白的表達(dá)水平；同時(shí)留取左側(cè)肺組織行肺組織勻漿細(xì)菌培養(yǎng)及菌落計(jì)數(shù)。3.應(yīng)用SPSS17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果：1、PA感染組小鼠肺組織病理改變?cè)?4小時(shí)最為嚴(yán)重,炎癥范圍廣,程度重,3、9

4、小時(shí)與之相比均較輕,但均有明顯的炎癥改變；而對(duì)照組的肺泡及肺間質(zhì)結(jié)構(gòu)基本正常,無明顯出血及炎細(xì)胞浸潤。并且PA感染組3、9、24小時(shí)肺組織勻漿均培養(yǎng)出銅綠假單胞菌,菌落計(jì)數(shù)均>105CFU/g,而對(duì)照組肺組織勻漿各時(shí)間點(diǎn)均未培養(yǎng)出細(xì)菌。2、PA感染組3、9、24小時(shí)小鼠肺組織中HIF-1α蛋白的表達(dá)均有明顯的增高,其中細(xì)菌接種3小時(shí)后HIF-1α的表達(dá)就有升高,9小時(shí)繼續(xù)升高,24小時(shí)最高。而對(duì)照組HIF-1α各時(shí)間點(diǎn)均未見明顯表達(dá)。3

5、、PA感染組3、9、24小時(shí)小鼠血清中TNF-α、IL-8的水平較對(duì)照組均有明顯的增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其中TNF-α、IL-8的水平均在3小時(shí)開始上升,9小時(shí)繼續(xù)升高,24小時(shí)最高。4、HIF-1α蛋白的表達(dá)與TNF-α、IL-8的濃度呈正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)分別為0.827和 0.974)。結(jié)論：1. HIF-1α參與了銅綠假單胞菌肺炎的炎癥過程,且炎癥愈重表達(dá)愈明顯。2. HIF-1α 是炎癥細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中的重要一環(huán),