ppGpp在銅綠假單胞菌毒力及致病性調控中的作用研究.pdf

1、銅綠假單胞菌（PA）是一類廣泛分布于自然界的革蘭陰性條件致病菌，可感染人類、動物、植物等宿主，尤其易感免疫缺陷的患者，在臨床上引發(fā)一系列急、慢性感染，有較高的發(fā)病率和死亡率。近年來，各種抗生素類藥物的濫用導致了多重耐藥銅綠假單胞菌的頻現(xiàn)，細菌快速的突變、現(xiàn)存抗生素的失效以及新藥開發(fā)的滯后，均為臨床上相關感染的防控與治療帶來了很大的挑戰(zhàn)。因此，深入研究并闡明銅綠假單胞菌的毒力系統(tǒng)及致病機理，將為該菌的感染防治提供理論基礎。
　　毒力

2、和侵襲力是細菌致病的重要因素，銅綠假單胞菌可分泌產生綠膿素、綠色熒光素、彈性蛋白酶、內毒素A、磷脂酶C等，并可在定植體表面分泌藻酸鹽等多糖粘液類物質，形成生物膜，從而增加細菌對抗生素及機體免疫防御系統(tǒng)的耐受力。此外，為了快速感知和適應不斷變化的生存環(huán)境，細菌利用復雜的調控系統(tǒng)啟動相關基因的表達和細胞間的信號通路，對環(huán)境變化作出群體性調整。細菌的應激反應存在一系列保守的調控系統(tǒng)，其中以胞內 GDP/GTP衍生物四磷酸/五磷酸鳥嘌呤核苷分子

3、[(p)ppGpp]作為信號分子，可有效應對營養(yǎng)脅迫或環(huán)境壓力。大部分革蘭陰性菌的胞內ppGpp水平受合成酶RelA和雙功能（同時具有合成和分解功能）SpoT酶的共同調控，在氨基酸、碳源、磷源饑餓或氧化壓力等不利生長條件下被大量誘導合成，在轉錄水平調控各類基因的表達。相關研究表明，由ppGpp分子介導的應激反應可顯著影響銅綠假單胞菌的生長、毒力、壓力應激等，但相關的作用途徑和具體的作用機制研究尚少。因此，深入研究和探討ppGpp對銅綠假

4、單胞菌毒力因子的影響及可能的作用機制，對于臨床上PA感染的防治具有潛在重要意義。
　　本研究利用同源重組技術，由銅綠假單胞菌野生型PAO1菌株構建了relA/spoT雙基因敲除株（ΔRS）及其回補株（ΔRS++），檢測發(fā)現(xiàn)ΔRS株的ppGpp合成能力完全缺失；為了探究這種胞內核苷分子在細菌毒力和致病中所發(fā)揮的作用，分別進行小鼠急性肺感染和細胞感染實驗，發(fā)現(xiàn)ΔRS株毒力顯著降低；進一步檢測各類胞外毒力因子的分泌情況，發(fā)現(xiàn)ΔRS株的綠