白眉蝮蛇去整合素Adinbitor的定點突變對其生物學(xué)活性的影響.pdf

1、大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文白眉蝮蛇去整合素Adinbit的定點突變對其生物學(xué)活性的影響姓名：陳洪巖申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：趙寶昌20050601因為對其他的整合素的廣泛的反應(yīng)性，含有RGD特征模體的蛇毒去整合素在體內(nèi)抗血栓形成方面的治療潛能受到了一定的限制‘13】【14】。而含有KGD序列的去整合素barbourin與蛇毒中其他的GPIIbIIIa拮抗劑具有高度的同源性，但卻是此家族中第一個不含有RGD序列的

2、成員，以保守的賴氨酸代替精氨酸是賦予barbourin整臺素作用的特異性的唯一的一個結(jié)構(gòu)特點，因為蛇毒中含有賴氨酸的多肽類似物也具有對GPIIbIIIa高度特異性。因此，barbourin代表了一個具有特異結(jié)構(gòu)特征的有效的抗GPIIbIIIa的代表而成為很有價值的血小板聚集抑制劑【l51。從barbourin中得到啟示，本論文中采用定點突變的方法以賴氨酸(K)代替RGD序列中的精氨酸(R)，實驗中首先設(shè)計突變引物采用PCR的方法進行定點

3、突變。將突變Adinbitor基因進行克隆、轉(zhuǎn)化與誘導(dǎo)后，得到了該蛋白的可溶性高效表達。經(jīng)組氨酸親和層析純化，獲得了分子量為9KD的均質(zhì)蛋白。利用人富含血小板血漿的測試系統(tǒng)進行的血小板聚集實驗結(jié)果表明，突變rAdinbitor也可呈劑量依賴性方式抑制由ADP誘導(dǎo)的人血小板聚集。其抑制人血小板聚集的IC50=008lxmol／L，與rAdinbitor相比兩者在抗血小板聚集作用方面沒有顯著的差異。血管新生的實驗結(jié)果表明，rAdinbito

4、r可顯著抑制體內(nèi)血管新生作用，與rAdinbitor相比，突變rAdinbitor目[JKGD—rAdinbitor(下文均采用此名稱)未檢測到對體內(nèi)血管新生的抑制作用?？傊菊撐耐ㄟ^定點突變的方法成功的獲得了KGD序列代替RGD序列的rAdinbitor，并成功的改變了其生物學(xué)活性。獲得了能顯著抑制血小板聚集而無明顯的抑制血管新生作用的去整合素。所有這些實驗結(jié)果提示，KGDrAdinbitor作為含有KGD序列的去整合素的典型代表，