依娜普利、厄貝沙坦及血管緊張素-(1-7)對(duì)快速心房起搏犬心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)及RAS系統(tǒng)的影響.pdf

1、目的：通過(guò)右心房快速起搏(500次/min)2周建立慢性快速心房起搏犬模型，觀察右心房組織病理學(xué)改變，以及血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2(ACE2)、血管緊張素Ⅱ受體亞型(AT1R、AT2R)、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)、磷酸化的細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(P-ERK)、及Mas受體的表達(dá)情況，同時(shí)應(yīng)用依那普利、厄貝沙坦和血管緊張素-(1-7)[Ang-(1-7)]為干預(yù)措施，觀察其對(duì)快速心房起搏誘發(fā)的結(jié)構(gòu)重構(gòu)及腎素-血管緊張

2、素系統(tǒng)(RAS)的影響。
　　 方法：普通成年雜種犬30只分為5組，分別為假手術(shù)組(Sham，S組)、心房起搏對(duì)照組(Control，C組)、心房起搏+依那普利干預(yù)組(Enalapril，EN組)、心房起搏+厄貝沙坦干預(yù)組(Irbesartan，IB組)、心房起搏+血管緊張素-(1-7)干預(yù)組(Ang-(1-7)，A組)，每組6只。所有犬經(jīng)戊巴比妥鈉靜脈麻醉后，經(jīng)頸外靜脈置入右心房起搏電極，電極遠(yuǎn)端連接特制心房起搏器，起搏器埋于

3、肩胛后囊袋中。除假手術(shù)組外，其余各組均給予起搏刺激，起搏模式AOO，起搏電壓5V，脈寬0.2ms，頻率500次/分，維持起搏2周。EN組及IB組分別于起搏開(kāi)始前3天開(kāi)始給予口服依那普利2mg·kg-1·d-1或厄貝沙坦60mg·kg-1·d-1，維持至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。A組犬皮下埋置Alzet()滲透泵，經(jīng)頸外靜脈給予Ang-(1-7)6μg·Kg-1·h-1，持續(xù)泵入至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。2周后取右心房肌組織，一部分用于提取組織總RNA并應(yīng)用RT-PC

4、R方法檢測(cè)各組ACE2和AT1R的mRNA表達(dá)情況。一部分置于10％中性福爾馬林溶液中固定，制作石蠟切片，應(yīng)用HE染色觀察心房肌細(xì)胞及組織結(jié)構(gòu)的病理學(xué)改變，應(yīng)用免疫組織化學(xué)法觀察各組ACE、ACE2、AT1R、AT2R、ERK、P-ERK和Mas的蛋白表達(dá)情況。一部分用于提取組織總蛋白，應(yīng)用WesternBlot方法檢測(cè)各組ERK1/ERK2的蛋白表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.心房組織RT-PCR結(jié)果顯示，起搏2周

5、后C組ACE2 mRNA表達(dá)較S組降低，但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，AT1R mRNA表達(dá)水平較S組顯著升高(P<0.05)，應(yīng)用依那普利、厄貝沙坦、Ang-(1-7)干預(yù)使ACE2 mRNA表達(dá)增加，與起搏組有顯著差異(P<0.05)，AT1R mRNA表達(dá)水平下調(diào)，EN組和IB組較C組有顯著差異(P<0.05)。
　　 2.心房組織病理學(xué)HE染色顯示，起搏2周可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)犬心房肌細(xì)胞大小不均，細(xì)胞排列紊亂，并可見(jiàn)明顯的

6、脂肪組織浸潤(rùn)，心肌間隙可見(jiàn)纖維組織填充。依那普利、厄貝沙坦和Ang-(1-7)可明顯減輕起搏2周誘發(fā)的心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)。
　　 3.心房組織免疫組化結(jié)果顯示，心房快速起搏2周后可引起心臟局部ACE、AT1R、AT2R、ERK、P-ERK和Mas受體蛋白表達(dá)增加，C組免疫組化陽(yáng)性染色程度顯著高于S組(P<0.05或P<0.001)，應(yīng)用依那普利、厄貝沙坦和Ang-(1-7)后ERK、P-ERK、Mas表達(dá)明顯降低(與C組比較P<0.0

7、5或P<0.001)，厄貝沙坦和Ang-(1-7)干預(yù)可使ACE、AT1R表達(dá)顯著下調(diào)(與C組比較P<0.05或P<0.001)，Ang-(1-7)可引起AT2R表達(dá)顯著下降(與C組比較P<0.05)。ACE2表達(dá)在C組顯著低于S組(P<0.001)，應(yīng)用依那普利、厄貝沙坦和Ang-(1-7)后ACE2表達(dá)明顯上調(diào)(與C組比較P<0.05)。
　　 4.心房組織Western Blot結(jié)果顯示，心房快速起搏2周后ERK1/ERK

8、2蛋白表達(dá)明顯上調(diào)(與S組比較P<0.05)，依那普利、厄貝沙坦和Ang-(1-7)干預(yù)可顯著降低ERK1/2的水平(與C組比較P<0.05)。
　　 結(jié)論：快速心房起搏2周可誘發(fā)明顯的心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)，并伴有心臟局部的RAS活化，表現(xiàn)為ACE、ERK、P-ERK和Mas的蛋白表達(dá)增加，ACE2的mRNA水平和蛋白表達(dá)水平均下調(diào)，AT1R的mRNA和蛋白表達(dá)水平均上調(diào)。依那普利、厄貝沙坦和Ang-(1-7)干預(yù)可減輕心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)的程