人巨細(xì)胞病毒與2型糖尿病的相關(guān)性研究.pdf

1、人巨細(xì)胞病毒(Human cytomegalovirus，HCMV)屬于β-皰疹病毒亞科的雙鏈DNA病毒，基因大小約為236kb，大約有165個(gè)開放閱讀框編碼蛋白質(zhì)。HCMV是引起人類感染性疾病的常見病原體之一。人類對(duì)HCMV普遍易感，在世界范圍內(nèi)HCMV感染的流行率為40％-100％，HCMV可通過胎盤、密切接觸、注射、輸血、性交或器官移植等途徑感染。和其他皰疹病毒一樣， HCMV感染機(jī)體后，可長(zhǎng)期存在于機(jī)體內(nèi)，無(wú)法清除;并在一生中潛

2、伏性感染與活動(dòng)性感染反復(fù)交替發(fā)生或可獲得再感染。HCMV感染是否引起HCMV疾病與機(jī)體的免疫狀態(tài)有關(guān)。在免疫正常的個(gè)體中，通常引起無(wú)癥狀感染或類似單核細(xì)胞增多癥的輕微臨床表現(xiàn)。
　　2型糖尿病(Type2 Diabetes Mellitus,T2DM)舊稱非胰島素依賴型糖尿病(Noninsulin-dependent diabetes mellitus,NIDDM)，約占糖尿病總發(fā)病率的90％-95％。由于人們生活方式的改變、生活

3、水平的提高，目前糖尿病的發(fā)病率逐漸上升，糖尿病及其后續(xù)發(fā)生的并發(fā)癥給人們的健康及整個(gè)社會(huì)的發(fā)展帶來(lái)了嚴(yán)重的負(fù)擔(dān)。在糖尿病的發(fā)生、.發(fā)展過程中，慢性、持續(xù)的高血糖狀態(tài)及長(zhǎng)期代謝紊亂等可引起全身器官、組織功能障礙及衰竭，尤其是對(duì)視網(wǎng)膜、腎臟、神經(jīng)及心血管系統(tǒng)的損害非常常見，嚴(yán)重威脅人類健康。T2DM早期主要表現(xiàn)為胰島素抵抗伴胰島素相對(duì)缺乏，晚期主要表現(xiàn)為胰島素分泌不足伴胰島素抵抗。與1型糖尿病不同的是，2型糖尿病患者的胰島細(xì)胞功能還尚存在。

4、目前，對(duì)T2DM病因認(rèn)識(shí)還不足，T2DM是由多個(gè)基因及環(huán)境因素作用引起的病因復(fù)雜的疾病。經(jīng)過長(zhǎng)期的研究發(fā)現(xiàn)，下列因素與2型糖尿病的發(fā)生有關(guān):基因遺傳因素、脂蛋白a、高血糖癥、胰島淀粉樣多肽、高同型半胱氨酸血癥、凝血功能、雌激素缺乏、吸煙。然而，這些最常見的風(fēng)險(xiǎn)因素卻沒有占到糖尿病發(fā)病率的5-25％。因此，仍然存在其他有待研究的對(duì)糖尿病的發(fā)生起著主要作用的危險(xiǎn)因素，其中主要包括炎癥及感染。
　　近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)病毒感染與糖尿病的發(fā)生有

5、關(guān)。病毒感染可直接或通過免疫反應(yīng)損傷胰島β細(xì)胞最終導(dǎo)致糖尿病的發(fā)生。大量的研究結(jié)果表明，HCMV感染與1型糖尿病、移植后糖尿病的發(fā)生有關(guān)。然而，HCMV感染與2型糖尿病的相關(guān)性目前仍不明確，僅僅發(fā)現(xiàn)在2型糖尿病患者中，HCMV感染率較高，如在國(guó)內(nèi)的研究中，HCMV在2型糖尿病人群中的感染率約為93％，在國(guó)外的一些研究中，HCMV在2型糖尿病患者中的感染率也較高，如美國(guó)為77％，荷蘭為89.3％，捷克為77％。但HCMV活動(dòng)性感染對(duì)2型糖

6、尿病患者血糖調(diào)節(jié)，以及持續(xù)HCMV感染和反復(fù)HCMV活動(dòng)對(duì)2型糖尿病的并發(fā)癥的影響尚不清楚。
　　目的:
　　本研究旨在通過調(diào)查人巨細(xì)胞病毒感染在2型糖尿病患者中的流行率，探討人巨細(xì)胞病毒活動(dòng)性感染對(duì)2型糖尿病患者血糖、C肽、糖化血紅蛋白的影響;并通過測(cè)定反映HCMV長(zhǎng)期感染的指標(biāo)HCMV IgG滴度水平，研究HCMV IgG滴度水平與2型糖尿病患者并發(fā)癥的相關(guān)性。
　　方法:
　　1.病例資料
　　收集2

7、014年3月至6月在廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院內(nèi)分泌科住院治療的222例2型糖尿病患者。2型糖尿病的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照美國(guó)糖尿病協(xié)會(huì)2013年頒布的糖尿病診斷與分型指南。除外合并腫瘤、自身免疫性疾病、1型糖尿病患者。收集患者的一般資料包括:年齡、性別、體重指數(shù)(BMI)、糖尿病病程、糖尿病并發(fā)癥（糖尿病神經(jīng)病變、糖尿病視網(wǎng)膜病變、糖尿病腎病、糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化）、吸煙史、高血壓病史。收集臨床實(shí)驗(yàn)室檢查資料，主要包括:空腹血糖、餐后2小時(shí)血糖、空腹C肽

8、、餐后2小時(shí)C肽、糖化血紅蛋白;甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白等。2型糖尿病患者動(dòng)脈粥樣硬化的診斷主要通過血管彩超確診。
　　2.實(shí)驗(yàn)方法
　　2.1聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)HCMV DNA:
　　采集上述222例2型糖尿病患者空腹靜脈抗凝血5ml，運(yùn)用人淋巴細(xì)胞分離液對(duì)抗凝血進(jìn)行淋巴細(xì)胞分離，將分離得到的細(xì)胞用體液病毒DNA小量試劑盒提取病毒DNA，采用巢式PCR法擴(kuò)增HCMV病毒IE片段來(lái)檢測(cè)樣本中的HCM

9、VDNA，運(yùn)用瓊脂糖凝膠電泳方法鑒定PCR產(chǎn)物大小。
　　2.2實(shí)時(shí)定量PCR
　　根據(jù)GenBank上發(fā)表的HCMV基因序列，用Primer Premier5.0軟件針對(duì)HCMV病毒的IE基因保守區(qū)設(shè)計(jì)1對(duì)引物（目的片段大小為76bp），采用SYBR GreenI-熒光定量PCR法對(duì)巢式PCR檢測(cè)HCMVDNA陽(yáng)性臨床體液標(biāo)本進(jìn)行病毒載量測(cè)定。
　　2.3化學(xué)發(fā)光法測(cè)定HCMV IgG滴度
　　采集患者的非抗凝

10、血標(biāo)本3ml運(yùn)用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)HCMVIgG滴度。
　　2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　使用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。正態(tài)分布的計(jì)量資料以(x2±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn);非正態(tài)分布的計(jì)量資料以（中位數(shù)，四分位間距）表示，組間比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料用(n/％)形式表示，組間比較采用x2檢驗(yàn)。邏輯回歸分析:以有無(wú)動(dòng)脈粥樣硬化為應(yīng)變量（Y:無(wú)=0，有=1）;以下列因素作為自變量:年齡、性別、糖尿病病程、BMI、吸煙

11、史、高血壓病史、總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白。取雙側(cè)檢驗(yàn)，P值＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.HCMV在2型糖尿病患者中的感染率及HCMV活動(dòng)性感染與血糖調(diào)節(jié)的關(guān)系
　　在本實(shí)驗(yàn)222例人群中，HCMV的感染率（IgG陽(yáng)性率）高達(dá)99.0％(204/206)。應(yīng)用巢式PCR方法檢測(cè)T2DM人群中的HCMV DNA，其陽(yáng)性率（活動(dòng)性感染率）為22.3％(45/222)。通過比較HC

12、MV DNA陽(yáng)性及HCMV DNA陰性2型糖尿病患者臨床指標(biāo)發(fā)現(xiàn)，HCMV DNA陽(yáng)性患者年齡顯著低于DNA陰性患者人群(分別為54.1±14.9，59.1±13.2)(P=0.028)，提示HCMV活動(dòng)性感染在年輕患者中常見。同時(shí)也分析了HCMV DNA陽(yáng)性患者與DNA陰性患者的空腹血糖、餐后2小時(shí)血糖、糖化血紅蛋白、空腹C肽、餐后2小時(shí)C肽，均無(wú)顯著性差異。此外，通過比較HCMV DNA陽(yáng)性2型糖尿病患者不同DNA病毒載量組間血糖、

13、C肽、糖化血紅蛋白等指標(biāo)的差異后，空腹血糖、餐后2h血糖、空腹C肽、餐后2hC肽、糖化血紅蛋白等指標(biāo)在不同DNA病毒載量組間均無(wú)顯著性差異，即DNA病毒載量與2型糖尿病患者血糖調(diào)節(jié)無(wú)顯著性影響。
　　2.HCMVIgG滴度與2型糖尿病并發(fā)癥的關(guān)系
　　化學(xué)發(fā)光法成功測(cè)得206例2型糖尿病患者的HCMVIgG滴度，其中204例患者提示HCMV既往感染（IgG滴度＞1U/ml），將IgG滴度水平按照統(tǒng)計(jì)學(xué)四分位數(shù)法分成四組:組1

14、共51例患者（IgG滴度為:1-126U/ml），組2共51例患者(IgG滴度為:127-276U/ml)，組3共45例患者（IgG滴度為:277-499U/ml），組4共57例患者（IgG滴度為:＞500U/ml）。比較不同IgG滴度水平組2型糖尿病患者并發(fā)癥的發(fā)生率，結(jié)果發(fā)現(xiàn):不同HCMV IgG滴度水平間糖尿病腎病、糖尿病視網(wǎng)膜病變、糖尿病神經(jīng)病變的發(fā)生率均無(wú)顯著性差異（P值均＞0.05）。但四組間2型糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生率有

15、顯著性差異(P=0.002)，組間比較結(jié)果顯示:第一組與第二組、第一組與第四組糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生率均有顯著性差異，P值分別為0.014和0.0004;然而第一組與第三組動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生率沒有顯著性差異，P值為0.109。
　　3.HCMVIgG滴度水平是2型糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素
　　通過上述比較發(fā)現(xiàn)，IgG滴度水平與2型糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生率有關(guān)，實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步行邏輯回歸分析探討IgG滴度是否為糖尿病動(dòng)脈

16、粥樣硬化的獨(dú)立危險(xiǎn)因。首先將是否存在動(dòng)脈粥樣硬化為應(yīng)變量Y，將HCMVIgG滴度按照統(tǒng)計(jì)學(xué)四分位數(shù)方法分成四組（同上述），調(diào)整年齡、性別、糖尿病病程、高血壓病史、吸煙史、甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白等危險(xiǎn)因素后，HCMV IgG滴度＞500U/ml和IgG滴度為127-276U/ml與動(dòng)脈粥樣硬化顯著相關(guān);然而與IgG滴度低水平1-126U/ml相比，IgG滴度為277-499U/ml動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)度為2.6，

17、95％可信區(qū)間為0.9-7.5。進(jìn)一步將IgG滴度分成兩組（IgG滴度1-126U/ml、IgG滴度＞127U/ml），調(diào)整所有危險(xiǎn)因素后，結(jié)果顯示IgG滴度大于127Um/ml可顯著增加動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生率，OR值為4.6(95％可信區(qū)間:1.9-11.3)。
　　結(jié)論:
　　1.HCMV活動(dòng)性感染對(duì)2型糖尿病患者血糖調(diào)節(jié)無(wú)顯著性影響。
　　2.高HCMVIgG滴度水平與2型糖尿病患者動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生率有關(guān)，與糖尿