局部聯(lián)合應(yīng)用rhGM--CSF和胰島素對(duì)糖尿病大鼠燙傷創(chuàng)面愈合的影響及機(jī)制探索.pdf

1、目的：研究糖尿病大鼠燙傷創(chuàng)面局部聯(lián)合rhGM-CSF和胰島素治療對(duì)創(chuàng)面愈合的影響，并探索其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室用常規(guī)飼料喂養(yǎng)60只健康雄性SD大鼠1周，編號(hào)并按隨機(jī)數(shù)字表法，抽取50只SD雄性大鼠，制造糖尿病模型，12h禁食（不禁水）后，并根據(jù)大鼠體重以55mg/kg，給予新鮮配制的1％鏈尿佐菌素(STZ)溶液腹腔單劑量注射;并用相同劑量檸檬酸緩沖液腹腔單劑量注射實(shí)驗(yàn)對(duì)照組A組。3天后測(cè)血糖（取大鼠尾靜脈血），對(duì)不達(dá)

2、標(biāo)者的，再次使用新鮮配制的1％STZ腹腔注射(10～15mg/kg)。大鼠的血糖穩(wěn)定后（注射后繼續(xù)喂養(yǎng)3-4周），在大鼠的背部兩側(cè)各自造成一處深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面，糖尿病燙傷模型成功后（未成功造模有10只），編號(hào)并按隨機(jī)數(shù)字表法分為5組：糖尿病燙傷對(duì)照組(B)、胰島素組(C)、rhGM-CSF組(D)、胰島素聯(lián)合rhGM-CSF治療組(E)，剩余的10只大鼠為正常燙傷對(duì)照組(A)。其中A組創(chuàng)面覆蓋浸有5mL生理鹽水的紗布治療;B組創(chuàng)面覆蓋浸有

3、5mL生理鹽水的紗布治療;C組創(chuàng)面覆蓋浸有5U諾和靈30R+5mL生理鹽水的紗布治療;D組創(chuàng)面覆蓋浸有25ug rhGM-CSF+5mL生理鹽水的紗布治療;E組創(chuàng)面覆浸有5U諾和靈30R+25ug rhGM-CSF+5mL生理鹽水的紗布覆蓋。第3、第7、第11、第15、第21天肉眼察看各組創(chuàng)面的愈合情況，測(cè)定創(chuàng)面的愈合率，并用免疫組化檢測(cè)創(chuàng)面的CD31、HIF-1α和VEGF陽性表達(dá)及熒光PCR法測(cè)量HIF-1αmRNA的含量。

4、　　結(jié)果：通過隨機(jī)抽取糖尿病大鼠的胰腺組織，進(jìn)行組織學(xué)的觀察，全部證實(shí)胰島組織的細(xì)胞大部分遭受破壞，即糖尿病模型誘導(dǎo)成功。隨機(jī)抽取各組燙傷創(chuàng)面的全層皮膚，行HE染色切片均證明：為深Ⅱ度的燙傷創(chuàng)面。傷后第3、7、11、15、21天各組大鼠創(chuàng)面均逐漸縮小或愈合，愈合率逐漸升高，其中尤以A組、E組大鼠創(chuàng)面組織內(nèi)成纖維細(xì)胞及新生毛細(xì)血管等生長速度最快，愈合最快。燙傷后第7、11、15、21天A、C、D、E組創(chuàng)面愈合率較B組明顯增高(p＜0.01

5、)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;A、E組創(chuàng)面愈合率較C、D組增高(p＜0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;A組與E組，C組與D比較(p＞0.05)，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各組VEGF陽性表達(dá)傷后就有表達(dá)，其濃度較低，之后增加，達(dá)到峰值，后逐漸回落;燙傷后第3、7、11、15、21天，A組、C組、D組、E組VEGF陽性表達(dá)高于B組(p＜0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;A、E組VEGF陽性表達(dá)高于C組、D組(p＜0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。HIF-1α的陽性表達(dá)各組在傷后

6、就有表達(dá)，其濃度較低，之后增加，達(dá)到峰值，后逐漸回落;燙傷后第3、7、11、15、21天，A、C、D、E組HIF-1α的陽性表達(dá)明顯低于B組(p＜0.01)，具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;燙傷后第3、7、11天，C、D組HIF-1α的陽性表達(dá)高于A、E組(p＜0.05)，具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。HIF-1αmRNA相對(duì)量開始含量較低，之后增加，達(dá)到峰值，后逐漸回落;第7、11、15、21天：E組HIF-1αmRNA相對(duì)量低于A、B、C、D組(p＜0.

7、01)，具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;C、D組HIF-1α的陽性表達(dá)低于B組(p＜0.01)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;C組與D組之間比較(P＜0.05)，具有差異性。CD31的陽性表達(dá)傷后濃度較低，之后增加，達(dá)到峰值，后逐漸地回落;燙傷后第3、7、11、15、21天，A、E組CD31陽性表達(dá)高于B、C、D組(p＜0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;燙傷后第3、7、21天，C、D組CD31陽性表達(dá)高于B組(p＜0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;第11、15天，C、D組與