PKA、PKC在多西他賽所致神經(jīng)病理性疼痛中的作用.pdf

1、背景與目的：
　　神經(jīng)病理性疼痛的治療對于目前醫(yī)學(xué)來說無疑是一個(gè)挑戰(zhàn)。在英、美等發(fā)達(dá)國家約有1％的人受到神經(jīng)病理性疼痛的困擾，尤其是老年患者。所以尋找能夠治療神經(jīng)病理性疼痛的方法是近年醫(yī)學(xué)熱點(diǎn)之一,世界各國都非常重視對神經(jīng)病理性疼痛的藥物研究?，F(xiàn)階段對于治療神經(jīng)病理性疼痛有效的藥物主要是抗驚厥藥和NMDA受體拮抗劑等。而這些治療神經(jīng)病理性疼痛有效的藥物對于抗腫瘤藥物引起的神經(jīng)病理性疼痛的作用還不明確，有關(guān)的研究很少。
　　而

2、且惡性腫瘤發(fā)病率的不斷上升，抗瘤藥物的應(yīng)用比例也越來越大，天然植物類抗腫瘤藥是在眾多抗腫瘤藥中占比最大的，而其中多西他賽類使用最多。由于多西他賽超過劑量易產(chǎn)生神經(jīng)毒性，甚至形成慢性神經(jīng)病理性疼痛，且對于現(xiàn)階段治療神經(jīng)病理性疼痛有效的藥物不敏感。
　　因此，本實(shí)驗(yàn)選擇合適劑量多西他賽建立神經(jīng)病理性疼痛模型，研究其蛋白激酶的變化，并鞘內(nèi)注射相應(yīng)蛋白激酶抑制劑，探討其形成機(jī)制。
　　方法與結(jié)果：
　　第一部分選擇建立大鼠外周

3、神經(jīng)病理性疼痛模型的合適劑量
　　方法：將24只成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組（6只∕組），分別在第1，3，5，7天腹腔注射0mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg多西他賽，觀察大鼠的一般情況，并且記錄體重變化，測定用藥后的第3，5，7，12，16，20和25天大鼠的機(jī)械縮足反射閾值（MWT)和熱縮足潛伏期（TWL)。通過透射電鏡觀察用藥后第14天大鼠坐骨神經(jīng)纖維髓鞘的變化。
　　結(jié)果：四組一般檢測結(jié)果及基礎(chǔ)

4、機(jī)械縮足反射閾值（MWT)和基礎(chǔ)熱縮足潛伏期（TWL）差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05)，與對照組 A組相比， C組（多西他賽1mg/kg)從第3天開始，B組（多西他賽0.5mg/kg）、D組（多西他賽2mg/kg）從第5天開始，大鼠后肢機(jī)械縮足反射閾值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)。C組（多西他賽1mg/kg)在第12天大鼠后肢機(jī)械縮足反射閾值降至最低，與A組相比P<0.01。與對照組A組相比，C組（多西他賽1mg/kg)、D組（多西

5、他賽2mg/kg）從第3天開始，B組（多西他賽0.5mg/kg）第5-12天，大鼠后肢熱縮足潛伏期（TWL）差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)。C組（多西他賽1mg/kg)在第16天大鼠后肢熱縮足潛伏期（TWL）降至最低，與A組相比P<0.01。
　　第二部分多西他賽所致大鼠外周神經(jīng)病理性疼痛模型中 PKC、PKA、CaMKIIa的表達(dá)
　　方法：取體重在230—250g的成年雄性SD大鼠18只，隨機(jī)分為2組（9只∕組），對照

6、組和多西他賽組，多西他賽組在第1、3、5、7天將多西他賽組1mg/kg(溶于1ml生理鹽水中）注射到大鼠腹腔內(nèi)，對照組則給予等量的多西他賽溶劑聚氧乙基蓖麻油（25μl/kg溶于1ml生理鹽水中），觀察大鼠的一般情況，并且記錄體重變化，在第1、3、5、7、12、16、20天測定大鼠后肢機(jī)械縮足反射閾值（MWT)和熱縮足潛伏期（TWL)，第14天，兩組分別各取6只大鼠，深麻醉后斷頭處死，取L4-L6脊髓，用WesternBlot、Real-

7、timePCR檢測各組大鼠脊髓PKA、PKC和CaMKIIa的mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：由WesternBlot結(jié)果可知，實(shí)驗(yàn)組p-CaMKIIa的表達(dá)與對照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，實(shí)驗(yàn)組p-PKC、p-PKA表達(dá)明顯高于對照組(P>0.05)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Real-timePCR檢測出相似的結(jié)果。
　　第三部分鞘內(nèi)注射PKA、PKC抑制劑對多西他賽所致大鼠外周神經(jīng)病理性疼痛的影響
　　方法：取體

8、重在230-250g的成年雄性SD大鼠24只，鞘內(nèi)置管成功后,隨機(jī)分為4組（6只∕組）：PKA抑制劑組（PKA)、PKC抑制劑組（PKC)、生理鹽水組（NS)和空白對照組(Naive)。前三組在第1、3、5、7天在大鼠腹腔內(nèi)注射多西他賽1mg/kg(溶于1ml生理鹽水中），在第9、11、13天測痛完畢后，分別鞘內(nèi)注射PKA抑制劑、PKC抑制劑、生理鹽水各20μl?？瞻讓φ战M在第1、3、5、7天腹腔內(nèi)注射等量多西他賽溶劑聚氧乙基蓖麻油(2

9、5μl/kg溶于1ml生理鹽水中）。觀察對各組大鼠行為學(xué)改變，在1、3、5、7、9、11、13和15天分別測定大鼠后肢的機(jī)械縮足反射閾值（MWT)和熱縮足潛伏期（TWL)。第14天深麻醉后，每組處死3只SD大鼠，用免疫組織化學(xué)ABC法檢測L4-L6節(jié)段脊髓背角PKC表達(dá)。
　　結(jié)果：與Naive組相比，機(jī)械痛閾和熱痛閾P(yáng)KA組、NS組、PKC組在第5-9天在各時(shí)間點(diǎn)上都明顯降低（P<0.05)，PKA組、PKC組在第11-15天差

10、異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05)，但 PKA組、PKC組與 NS組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)。Naive組和PKA組脊髓背角PKA的表達(dá)明顯低于NS組，Naive組和PKC組脊髓背角PKC的表達(dá)明顯低于NS組。
　　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　行為學(xué)測定的組間比較采用重復(fù)變量數(shù)據(jù)的方差分析，其余計(jì)量資料采用單因素方差分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，以SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。