慢病毒載體介導(dǎo)COX-2基因沉默在有骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中的表達(dá)及對(duì)干細(xì)胞定向分化能力影響的研究.pdf

1、[背景]:目前，COX-2基因沉默在干細(xì)胞中的研究還處在初級(jí)階段。
　　[目的]:構(gòu)建攜帶COX-2基因沉默的慢病毒載體，觀察其在人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中的表達(dá)，以及其定向分化潛能變化情況。
　　[方法]:應(yīng)用重組慢病毒技術(shù)構(gòu)建攜帶沉默COX-2基因和綠色熒光蛋白的慢病毒載體，并用其轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)第3代的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，以無(wú)目的基因的慢病毒轉(zhuǎn)染人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和未做處理的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分別作為陰性對(duì)照組和空白組進(jìn)行對(duì)比。

2、轉(zhuǎn)染后7天分別提取各組細(xì)胞的總RNA和蛋白檢測(cè)COX-2表達(dá)量。對(duì)COX-2基因沉默的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和正常人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向誘導(dǎo)，觀察COX-2基因沉默對(duì)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂、成骨、成軟骨能力的影響。
　　[結(jié)果與結(jié)論]:慢病毒轉(zhuǎn)染3d后，熒光顯微鏡下可見人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞發(fā)出綠色熒光，陰性對(duì)照組轉(zhuǎn)染效率可達(dá)90％以上，實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染效率達(dá)85％以上。RT-PCR和Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，COX-2基因在人骨髓