高表達(dá)SERCA2a在大鼠心肌缺血再灌注損傷中的保護(hù)機(jī)制.pdf

1、目的：
　　研究提高心肌肌漿網(wǎng)鈣離子ATP酶（Sarcoplasmic reticulumCa2+-ATPase，SERCA2a）的表達(dá)在大鼠心肌缺血/再灌注（Myocardial ischemia-reperfusion,I/R）損傷中的保護(hù)作用及可能機(jī)制。
　　方法：
　　通過(guò)對(duì)Wistar大鼠受精卵原核內(nèi)微量注入攜帶有SERCA2a cDNA的質(zhì)粒PCAGGS-CCI，建立SERCA2a轉(zhuǎn)基因大鼠系。通過(guò)開(kāi)胸結(jié)扎

2、大鼠心臟左冠狀動(dòng)脈前降支30 min，再灌注24 h制備心肌缺血再灌注（ischemia-reperfusion，I/R）模型。設(shè)立組別分別為野生型對(duì)照組（WT）、野生型I/R組(WT+I/R)、轉(zhuǎn)基因型對(duì)照組（TG）、轉(zhuǎn)基因型I/R組（TG+I/R）。采用心功能分析系統(tǒng)檢測(cè)心室壓、動(dòng)脈壓等各項(xiàng)指標(biāo)；隨后取出心臟，采用Evans blue-triphenyltetrazolium chloride（TTC）染色法測(cè)定心肌組織梗死面積和缺

3、血面積；經(jīng)HE染色，觀察I/R之后各組的病理變化；Western blot檢測(cè)心肌組織中凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax及自噬相關(guān)蛋白Beclin-1和LC3B-II/LC3B-I的表達(dá)及變化。
　　結(jié)果：
　　1.心功能指標(biāo)
　　心功能分析數(shù)據(jù)顯示，麻醉狀態(tài)下，TG組和WT組大鼠心功能雖然存在著差異，但均在正常范圍，經(jīng)過(guò)I/R處理之后，TG組心功能指標(biāo)下降明顯低于W T組心功能下降（P<0.05）。
　　2. I

4、/R之后缺血面積與梗死面積的比較
　　TTC染色顯示，野生型和轉(zhuǎn)基因型大鼠心臟左冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎30 min再灌注24 h后，心肌組織缺血面積與左心室橫切面比值的平均值WT+I/R組與TG+I/R組并無(wú)顯著性差異（P>0.05）；梗死面積（infarction area）與缺血面積（isc he mia a rea）比值的平均值TG+I/R組顯著低于WT+I/R組（P<0.05），即在在結(jié)扎位置大體一致保證缺血面積相同的情況下由

5、缺血再灌注誘導(dǎo)的心肌組織損傷，WT型大鼠顯著高于TG型大鼠。
　　3.各組I/R后的心肌病理變化
　　HE染色結(jié)果顯示，對(duì)照組的心肌纖維排列規(guī)則，心肌間未見(jiàn)異常。W T+I/R組胞質(zhì)疏松、細(xì)胞間質(zhì)空隙增大提示間質(zhì)水腫且有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。而TG+I/R組則心肌纖維排列相對(duì)規(guī)則，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)相對(duì)較少。
　　4.凋亡相關(guān)蛋白和自噬相關(guān)蛋白
　　野生型與轉(zhuǎn)基因型大鼠I/R后凋亡相關(guān)蛋白和自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)情況表明，生理狀態(tài)

6、下，TG組大鼠心肌組織中抗凋亡的 Bcl-2表達(dá)顯著低于 WT組大鼠（P<0.05），經(jīng)過(guò)I/R處理之后，TG組大鼠Bcl-2表達(dá)顯著增加（P<0.05），而WT組大鼠Bc l-2表達(dá)的變化不顯著（P>0.05）。而促凋亡蛋白Ba x的表達(dá)在生理狀態(tài)下，WT和TG組相比較差別不顯著（P>0.05），但缺血30 min再灌注24 h后TG組Bax的表達(dá)與TG對(duì)照組相比顯著下降（P<0.05）并且顯著低于WT+I/R組（P<0.05）。而B(niǎo)

7、cl-2/Bax的值則顯示在WT和TG型大鼠中，I/R處理組與相應(yīng)的對(duì)照組相比均升高，但僅TG+I/R組具有顯著性差異（P<0.05），且比WT+I/R組升高的更加明顯（P<0.05）。在生理狀態(tài)下LC3B-II/LC3B-I的值在WT和 TG型大鼠心臟中表達(dá)無(wú)顯著差異（P>0.05），I/R之后TG+I/R組的LC3 B-II與LC3B-I的比值明顯高于 TG對(duì)照組（P<0.05）并且顯著高于 WT+I/R組（P<0.05）。而B(niǎo)ec