基于橄欖果實(shí)轉(zhuǎn)錄組的多酚代謝相關(guān)差異基因表達(dá)分析.pdf

1、橄欖是中國南方的一種具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值和藥理作用的亞熱帶果樹，然而不同品種之間的多酚含量和口感風(fēng)味差異較大，且缺少基因組和轉(zhuǎn)錄組水平等遺傳信息，嚴(yán)重阻礙了優(yōu)質(zhì)橄欖品種的選育以及果實(shí)品質(zhì)特征的研究，比如多酚類物質(zhì)的代謝調(diào)控。本研究以普通‘長營’品種和它的芽變品種‘清欖’作為實(shí)驗(yàn)材料，測定其果實(shí)多酚和黃酮含量，并首次利用Illumina高通量轉(zhuǎn)錄組測序（RNA-seq）技術(shù)來篩選兩種橄欖品種多酚代謝過程中差異表達(dá)的基因。主要研究結(jié)果如下：

2、r>　　1.采用紫外分光光度法測定‘長營’和‘清欖’果實(shí)不同發(fā)育階段多酚和黃酮含量。結(jié)果表明，從花后40d開始，‘長營’和‘清欖’果實(shí)的多酚含量隨著生長而逐漸升高，到130d左右達(dá)到最高峰，隨后開始降低；‘長營’的黃酮含量變化趨勢也是如此，雖然‘清欖’的黃酮含量在70d-100d階段稍微下降，但是總體含量依然呈上升趨勢，均到130d左右達(dá)到最高峰，然后開始下降，且‘長營’果實(shí)的多酚和黃酮含量約是‘清欖’的2倍。
　　2.針對(duì)橄欖果

3、實(shí)富含酚類、多糖、蛋白質(zhì)等次生代謝物的特點(diǎn)，本試驗(yàn)采用了百泰克總RNA抽提試劑盒法，Trizol法和CTAB法三種方法對(duì)橄欖果實(shí)總RNA進(jìn)行提取，以紫外分光光度計(jì)測定OD值、并用瓊脂糖凝膠電泳檢驗(yàn)其完整性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，CTAB法提取的RNA純度高，完整性較好，受多糖多酚影響較少以及無DNA和蛋白質(zhì)污染等優(yōu)點(diǎn)，符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)的要求。
　　3.利用RNA-seq技術(shù)對(duì)花后40d的‘長營’果實(shí)（CY），花后40d的‘清欖’果實(shí)（QY），

4、花后130d的‘長營’果實(shí)（CS）和130d的‘清欖’果實(shí)（QS）進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序，結(jié)果表明，4個(gè)cDNA文庫通過組裝共獲得了67698 unigenes，平均長度約750bp，N50為1242bp，其中有39098unigenes被成功注釋到NR、Swiss-Prot、KOG和KEGG數(shù)據(jù)庫。在130d的果實(shí)中篩選到11751個(gè)顯著差異表達(dá)基因（DEGs），相比于‘清欖’，‘長營’中絕大多數(shù)基因表達(dá)量顯著上調(diào)（9334，79.4％），此