黃芪、脈絡(luò)寧注射液載入修飾膠原對促血管新生的協(xié)同作用.pdf

1、【背景】由人工方法合成臨床所需要的組織和器官，并尋找可使支架內(nèi)快速血管化的方法稱為組織工程學(xué)。血管生成（Angiogenesis，angei-anagenesis）在促進細胞生長和組織修復(fù)起著重要的作用。有研究表明，黃芪、脈絡(luò)寧注射液可能具有一定的促血管生成作用，其機制可能與促進血管內(nèi)皮細胞增殖和DNA的合成，抑制細胞凋亡，上調(diào)多種促血管生長因子如血管內(nèi)皮細胞生長因子(vascularendothelialcellgrowthfacto

2、r,VEGF)、血小板衍化生長因子（platelet-derivedgrowthfactor，PDGF）和堿性成纖維細胞生長因子(basicfibroblastgrowthfactor，bFGF)等的表達，提高組織細胞血紅蛋白和羥脯氨酸含量有關(guān)。按5:1的配比將黃芪與當歸作用于CAM上，在血管新生和血管計數(shù)方面，其結(jié)果在血管新生及計數(shù)方面均顯著比其他配比組及生理鹽水空白組要好，在促進CAM血管新生方面具有更好的作用。盡管許多方面均已證實

3、中藥在體內(nèi)優(yōu)化促血管生長因子的作用，其局限性在于僅停留在口服和靜脈給藥方面，我們在過去的研究中已闡明黃芪微乳載入修飾后膠原和VEGF對CAM血管新生具有相似的促進作用。
　　 【目的】通過將黃芪、脈絡(luò)寧注射液載入修飾后膠原，觀察對促CAM血管新生的療效，并證明黃芪與脈絡(luò)寧之間的協(xié)同作用，同時探討黃芪-脈絡(luò)寧膠原對血管新生的細胞學(xué)影響及其可能的機制，為其應(yīng)用于臨床提供理論依據(jù)。
　　 【方法】用肝素鈉修飾Ⅰ型膠原，將黃芪注

4、射液、脈絡(luò)寧注射液及二者混合液加于修飾好的膠原上。實驗共分為5組，不加任何處理的單純雞胚孵化為空白組、將膠原放入雞胚尿囊膜上為控制組、膠原中載入1mL黃芪注射液為黃芪組、膠原中載入1mL脈絡(luò)寧注射液為脈絡(luò)寧組、膠原中載入各0.5mL黃芪注射液及脈絡(luò)寧注射液為黃芪+脈絡(luò)寧組，30min后將各組植入雞胚尿囊膜孵化，7d后取出，觀察雞胚存活情況及尿囊膜血管生長形狀，利用格子法計數(shù)雞胚尿囊膜內(nèi)和各組膠原內(nèi)不重復(fù)的3個視野毛細血管(50×)，采用

5、光度計法測定各組血紅蛋白含量，同時取創(chuàng)面中心肉芽組織，做病理CD31免疫組化后隨機取3個視野對rhVEGF165陽性細胞數(shù)進行計數(shù)。應(yīng)用增殖、遷移、管腔形成實驗觀察黃芪-脈絡(luò)寧膠原對大鼠胸主動脈內(nèi)皮細胞在血管新生各階段的作用，用WesternB1ot實驗檢測大鼠胸主動脈內(nèi)皮細胞VEGF的表達。
　　 【結(jié)果】各實驗組雞胚尿囊膜內(nèi)血管呈輪輻狀生長及雞胚尿囊膜包裹標本率高于空白組與控制組，雞胚尿囊膜內(nèi)微血管數(shù)、膠原內(nèi)微血管數(shù)、血紅蛋

6、白含量、rhVEGF165陽性細胞數(shù)均高于控制組，差異有顯著性意義(P＜0.01);其中黃芪+脈絡(luò)寧組又高于黃芪組與脈絡(luò)寧組，差異有顯著性意義(P＜0.05)。黃芪-脈絡(luò)寧膠原能明顯促進大鼠胸主動脈內(nèi)皮細胞的增殖率，與對照組比較，增加了90.22％(P＜0.01)；遷移率增加了211.43％(P＜0.01)；管腔形成數(shù)是對照組的2.46倍(P＜0.01)；同時刺激內(nèi)皮細胞VEGF蛋白表達增加了63.8％(P＜0.01)。