新型吲哚類HCV非核苷類NS5B抑制劑的設(shè)計(jì)、合成和活性評(píng)價(jià).pdf

1、丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus，HCV) RNA聚合酶(Non-Structure5B，NS5B)在HCV生命周期具有不可替代的重要作用，新型高效、低毒、抗耐藥并具有良好的藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)的NS5B抑制劑是抗HCV藥物研發(fā)的重要方向。
　　現(xiàn)有NS5B非核類抑制劑主要作用于三個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，分別是Thumb SiteⅠ、Thumb SiteⅡ和Palm Site。其中Thumb SiteⅠ是首個(gè)報(bào)導(dǎo)的非核苷類抑制劑作用

2、位點(diǎn)，而吲哚類化合物是最重要的NS5B Thumb SiteⅠ抑制劑。通過(guò)對(duì)大量的NS5B與Thumb SiteⅠ復(fù)合物晶體結(jié)構(gòu)解析、分子模擬以及3D-QSAR模型研究發(fā)現(xiàn)，該類化合物吲哚母環(huán)三位環(huán)己基所處的亞口袋尚有足夠的空間可以容納更大的取代基，而且該位置還有一些親水性的氨基酸殘基，從而為進(jìn)行環(huán)己基位置的改造提供了充分的理論依據(jù)。
　　本論文在對(duì)吲哚類Thumb SiteⅡ抑制劑的構(gòu)效關(guān)系及其與NS5B結(jié)合模式研究的基礎(chǔ)上，以

3、首個(gè)報(bào)導(dǎo)晶體復(fù)合物結(jié)合模式的化合物121為先導(dǎo)化合物，將環(huán)己基替換為不同的取代基;為了進(jìn)一步探討該類化合物的構(gòu)效關(guān)系，同時(shí)，還對(duì)吲哚母環(huán)6位的羧酸以及吲哚氮上的取代基進(jìn)行了一部分改造;設(shè)計(jì)并合成了一系列吲哚類非核苷NS5B Thumb SiteⅠ抑制劑。
　　目標(biāo)化合物的合成是以6-吲哚甲酸甲酯作為起始原料，首先在氮原子上引入乙酰嗎啉，然后，將吲哚母環(huán)的2位和3位溴化后進(jìn)行鈴木反應(yīng)，分別引入不同的取代基，最后將甲酯水解得到終產(chǎn)物，

4、最終得到25個(gè)目標(biāo)化合物，所有的化合物經(jīng)過(guò)MS、1H NMR和13C NMR驗(yàn)證。
　　利用光學(xué)表面等離子共振(SPR)技術(shù)，測(cè)定了目標(biāo)化合物與HCV NS5B的親和力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，部分化合物表現(xiàn)出了一定的親和力，其中化合物a02、a03、a11和b05均具有與陽(yáng)性對(duì)照化合物相當(dāng)甚至更好的親和力。特別是化合物a10(KD=2.8μM)和b13（KD=2.3μM），其與NS5B的親和力遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)陽(yáng)性對(duì)照化合物，分別是陽(yáng)性對(duì)照化合物1

5、21（KD=90.8μM）的32倍和39倍，可以作為苗頭化合進(jìn)行深入研究。
　　在細(xì)胞水平抑制HCV病毒復(fù)制的活性實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)以50μM為測(cè)試濃度時(shí)，先導(dǎo)化合物121對(duì)病毒復(fù)制的抑制率為48％，化合物a02，a10，b13對(duì)病毒復(fù)制的抑制率分別為83％，98％和96％，進(jìn)一步的梯度濃度活性實(shí)驗(yàn)測(cè)得三個(gè)化合物對(duì)病毒復(fù)制的抑制IC50值分別為8.09μM，1.33μM，4.59μM。其活性均大大超過(guò)了先導(dǎo)化合物。
　　總之，本論文