骨形成蛋白-7基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)腎缺血再灌注損傷修復(fù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 觀察骨形成蛋白-7（BMP-7）基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）對(duì)腎缺血再灌注損傷修復(fù)的影響，明確體內(nèi)BMP-7對(duì)MSCs向腎細(xì)胞定向分化的影響。 方法： 密度梯度離心法分離純化大鼠MSCs。慢病毒介導(dǎo)BMP-7基因體外轉(zhuǎn)染大鼠MSCs。PCR法檢測(cè)BMP7-MSCs細(xì)胞上清BMP-7 mRNA的表達(dá)。建立大鼠腎臟缺血再灌注損傷（IRI）模型，通過下腔靜脈注射將BMP7-MSCs移植入大鼠腎IRI模

2、型，同時(shí)設(shè)立對(duì)照組。分別于細(xì)胞移植術(shù)后第3、5、7、30d取大鼠雙側(cè)腎檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)（取腎前4h予腹腔注射BrdU，50mg/kg）：BrdU免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)細(xì)胞分裂活躍程度；上皮鈣粘蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、a-平滑肌肌動(dòng)蛋白（a-SMA）的免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)分析細(xì)胞的類型；膠原纖維染色檢測(cè)分析腎臟纖維化情況；綠色熒光蛋白的熒光顯微鏡檢測(cè)分析細(xì)胞是否來源于供體；PCR檢測(cè)分析波形蛋白、a-平滑肌肌

3、動(dòng)蛋白、BMP-7蛋白、上皮鈣粘蛋白表達(dá)量。 結(jié)果： 1、密度梯度離心法成功分離純化大鼠MSCs。 2、BMP-7修飾的重組MSCs構(gòu)建成功，重組MSCs表達(dá)BMP-7。 3、160例腎缺血再灌注損傷大鼠模型建立成功。 4、與對(duì)照組相比較，MSCs移植組在缺血再灌注腎損傷早期的Scr和BUN下降得更快（P<0.05） 5、與MSCs移植組比較，BMP7-MSCs移植組對(duì)大鼠缺血再灌注腎損傷

4、早期Scr和BUN的升高的抑制作用更顯著（P<0.05）。 6、與對(duì)照組相比，MSCs移植組的BrdU陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)明顯增多，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05） 7、與MSCs移植組相比，BMP7-MSCs移植組的BrdU陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)明顯增多，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 8、與MSCs移植組相比，BMP7-MSCs移植組的E-cadherin+/GFP+陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)明顯增多，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<

5、0.05）。 9、與對(duì)照組相比，MSCs移植組大鼠E-cadherin的mRNA明顯增多，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 10、與MSCs移植組相比，BMP7-MSCs移植組大鼠E-cadherin的mRNA明顯增多，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 11、與空白對(duì)照組相比，MSCs移植組α-SMA的表達(dá)更低，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 12、與MSCs移植組相比，BMP7-M

6、SCs移植組α-SMA的表達(dá)更低，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 13、與空白對(duì)照組相比，MSCs移植組Vimentin的表達(dá)更低，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 14、與MSCs移植組相比，BMP7-MSCs移植組Vimentin的表達(dá)更低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 15、與對(duì)照組相比，MSCs移植組大鼠BMP-7的mRNA明顯增多，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 16

7、、與MSCs移植組相比，BMP7-MSCs移植組大鼠BMP-7的mRNA明顯增多，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論： 密度梯度離心法能成功地分離純化大鼠MSCs。通過慢病毒載體能成功高效地將BMP-7轉(zhuǎn)染MSCs。外源MSCs和BMP7-MSCs對(duì)大鼠缺血再灌注腎損傷早期Scr和BUN的升高具有一定的抑制作用，能夠促進(jìn)缺血再灌注后腎損傷的腎臟細(xì)胞的增殖，能夠定向分化為腎小管細(xì)胞而修復(fù)腎損傷，能夠減輕腎IRI