NICD在促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)腎缺血再灌注損傷中的作用.pdf

1、研究目的：
　　腎缺血再灌注損傷（renal ischemia-reperfusion injury, RIRI）是誘發(fā)急性腎損傷（acute kidney injury，AKI）的主要原因，如腎移植、腎部分切除手術(shù)后都可能發(fā)生RIRI，從而誘發(fā)AKI。本研究通過體外構(gòu)建Notch1信號通路胞內(nèi)區(qū)片段NICD過表達(dá)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞模型（MigR1-NICD-MSCs），研究NICD基因過表達(dá)與腎缺血再灌注損傷修復(fù)的關(guān)系，進(jìn)而明確

2、NICD在促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)腎缺血再灌注損傷中的作用。
　　研究方法：
　　1.大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）分離及培養(yǎng)，觀察大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生長情況；
　　2.利用體外克隆技術(shù)構(gòu)建質(zhì)粒MigR1-NICD，然后轉(zhuǎn)染至大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞內(nèi)，通過抗性篩選出MigR1-NICD-MSCs細(xì)胞；
　　3.利用Real-time PCR法及Western blot法分別在RNA水平及蛋白水平檢測NICD在

3、MigR1-NICD-MSCs細(xì)胞中的表達(dá)情況；
　　4.CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測NICD對MigR1-NICD-MSCs細(xì)胞增殖能力的影響；
　　5.構(gòu)建大鼠 RIRI模型，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組及對照組，將等量 MigR1-NICD-MSCs細(xì)胞及MigR1-MSCs細(xì)胞分別注入實(shí)驗(yàn)組及對照組RIRI大鼠下腔靜脈，觀察并分別于基線水平、24h、48h、72h及96h抽血檢測血清肌酐和尿素氮水平；
　　6.分別取實(shí)驗(yàn)組及對照組大鼠

4、腎臟，做快速冰凍切片，H&E染色后顯微鏡下觀察兩組大鼠腎IRI病理差異；
　　7.統(tǒng)計(jì)分析。
　　研究結(jié)果：
　　1.Real-time PCR及 Western blot結(jié)果一致顯示，NICD在 MigR1-NICD-MSCs細(xì)胞的表達(dá)明顯高于在MigR1-MSCs細(xì)胞中的表達(dá)，表明NICD過表達(dá)細(xì)胞模型構(gòu)建成功；
　　2. CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示 MigR1-NICD-MSCs細(xì)胞生長速率明顯快于MigR1-

5、MSCs細(xì)胞，表明NICD可促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖；
　　3.實(shí)驗(yàn)組大鼠基線水平血清肌酐和尿素氮x±s分別為30.14±2.81、5.98±1.23；24h血清肌酐和尿素氮x±s分別為138.25±2.06、23.27±0.53；48h血清肌酐和尿素氮x±s分別為60.35±2.58、12.17±0.33；72h血清肌酐和尿素氮x±s分別為41.25±1.70、7.12±0.20;96h血清肌酐和尿素氮x±s分別為32.16±1

6、.63、6.23±1.14；對照組相應(yīng)時間點(diǎn)血清肌酐和尿素氮x±s分別為30.49±2.92、6.03±0.41；146.50±2.02、28.45±0.12；69.07±1.63、16.25±0.36；49.12±1.41、8.95±0.12；33.04±2.13、6.56±0.36；比較兩組基線水平及96h腎功能,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但是腎缺血再灌注24h、48h、72h后實(shí)驗(yàn)上述指標(biāo)水平明顯低于對照組（P<0.05）