芍藥苷對(duì)STZ所致INS-1細(xì)胞損傷的影響.pdf

1、近年來研究資料顯示，肥胖與胰島素抵抗之間呈高度的相關(guān)性，并且是肥胖者發(fā)生2型糖尿病、高血壓及脂質(zhì)代謝紊亂等的重要原因。
　　 芍藥苷(Paeoniflorin)是芍藥的主要有效成分之一，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為芍藥苷具有止痛、鎮(zhèn)靜、解痙、抗炎作用以及抗自由基損傷作用。我室前期所做的實(shí)驗(yàn)工作發(fā)現(xiàn)：白芍水提取液可以抑制去卵巢大鼠肥胖，改善脂代謝紊亂、清除體內(nèi)過多自由基；離體實(shí)驗(yàn)證明芍藥苷促進(jìn)離體脂肪組織釋放游離脂肪酸及降低丙二醛的含量，提高總抗

2、氧化能力水平。而芍藥苷是否對(duì)胰島細(xì)胞有直接作用，國(guó)內(nèi)外尚未見報(bào)道，所以本實(shí)驗(yàn)選擇不同濃度的芍藥苷觀察其對(duì)胰島細(xì)胞胰島素釋放的影響；同時(shí)用鏈脲佐菌素建立胰島細(xì)胞損傷模型，通過觀察芍藥苷對(duì)損傷胰島細(xì)胞的保護(hù)和修復(fù)作用，以研究芍藥苷的作用機(jī)制，并初步探討胰島素釋放的可能機(jī)制。
　　 選用大鼠胰島素瘤細(xì)胞INS-1，細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，以1×105個(gè)/ml接種于96孔板，培養(yǎng)24h后，分別加入各濃度藥物，作用12h。取細(xì)胞培養(yǎng)液測(cè)定細(xì)胞增殖

3、活力和胰島素、丙二醛、總抗氧化能力的水平。實(shí)驗(yàn)分為九組：①正常對(duì)照組；②芍藥苷組(10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L)；③STZ組(損傷組)；④芍藥苷(10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L)+STZ組(芍藥苷保護(hù)組)；⑤STZ+芍藥苷(10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L)組(芍藥苷修復(fù)組)；⑥阿托品組(10-6mol/L)；⑦阿托品(10-6mol/L)+芍藥苷(10

4、-7mol/L)組；⑧異搏定組(10-7mol/L)；⑨異搏定(10-7mol/L)+芍藥苷(10-7mol/L)組。
　　 實(shí)驗(yàn)數(shù)掘用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±S)表示，組間顯著性差異采用單因素方差分析法，P＜0.05被認(rèn)為有顯著性差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　 1.INS-1細(xì)胞對(duì)葡萄糖的刺激反應(yīng)
　　 與正常對(duì)照組相比，隨著葡萄糖濃度的增加(5.6～16.8 mmol/L范圍內(nèi))，INS-1細(xì)胞分泌的胰島素量也逐漸增

5、加；但22.4 mmol/L、33.6 mmol/L的葡萄糖則使胰島素的分泌量隨葡萄糖濃度的增加有所減少。
　　 2.芍藥苷對(duì)INS-1細(xì)胞增殖活力的影響
　　 與正常對(duì)照組相比，各濃度芍藥苷對(duì)INS-1細(xì)胞的增殖活力無明顯影響。
　　 3.芍藥苷對(duì)INS-1細(xì)胞胰島素釋放的影響
　　 與正常對(duì)照組相比，10-7mol/L，10-6mol/L的芍藥苷可分別不同程度的促進(jìn)INS-1細(xì)胞釋放胰島素，而10-5

6、mol/L的芍藥苷對(duì)INS-1細(xì)胞釋放胰島素?zé)o明顯的促進(jìn)作用。
　　 4.阻斷劑對(duì)INS-1細(xì)胞胰島素釋放的影響
　　 與正常對(duì)照組相比，阿托品組對(duì)INS-1細(xì)胞胰島素釋放沒有顯著影響，阿托品+芍藥苷組INS-1細(xì)胞胰島素釋放顯著升高；與阿托品組相比，阿托品+芍藥苷組對(duì)INS-1細(xì)胞胰島素釋放沒有顯著影響。
　　 與正常對(duì)照組相比，異搏定對(duì)INS-1細(xì)胞胰島素釋放沒有顯著影響，異搏定+芍藥苷組INS-1細(xì)胞胰島素

7、釋放顯著升高；與異搏定組相比，異搏定+芍藥苷組對(duì)INS-1細(xì)胞胰島素釋放沒有顯著影響。
　　 5.芍藥苷對(duì)STZ所致INS-1細(xì)胞損傷的保護(hù)和修復(fù)作用
　　 與正常對(duì)照組相比，STZ組INS-1細(xì)胞增殖活力明顯降低，胰島素釋放明顯減少，MDA含量升高，T-AOC下降。與STZ組相比，芍藥苷保護(hù)組的胰島素分泌量明顯升高，MDA含量明顯降低，T-AOC顯著升高。而芍藥苷修復(fù)組胰島素釋放沒有明顯變化，但MDA含量明顯降低，T-

8、AOC顯著升高。
　　 6.芍藥苷對(duì)INS-1細(xì)胞形態(tài)學(xué)及細(xì)胞周期分布和凋亡的影響
　　 與正常對(duì)照組相比，STZ組細(xì)胞形態(tài)變圓，細(xì)胞懸浮于細(xì)胞液中；在STZ損傷INS-1細(xì)胞前后加入各濃度芍藥苷，INS-1細(xì)胞形態(tài)與STZ組相比沒有明顯改變。
　　 正常對(duì)照組細(xì)胞分布為G1期48.930％，G2期3.386％，S期47.684％。STZ作用12h，細(xì)胞被阻滯在S期，G1期細(xì)胞減少，G2期無細(xì)胞分布。芍藥苷+ST

9、Z共同作用12h，細(xì)胞仍然被阻滯在S期，G1期細(xì)胞減少，G2期無細(xì)胞分布。
　　 正常對(duì)照組的細(xì)胞凋亡率為0.247％。與正常對(duì)照組相比，STZ組的細(xì)胞凋亡率明顯升高為0.743％。芍藥苷+STZ共同作用12h，細(xì)胞凋亡率較STZ組顯著回降，為0.441％。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：INS-1細(xì)胞對(duì)葡萄糖的刺激具有良好的反應(yīng)性；芍藥苷可以促進(jìn)INS-1細(xì)胞釋放胰島素，其作用可能部分經(jīng)由細(xì)胞膜上的膽堿能M受體和L-型的Ca2+