體外循環(huán)下低pH液復(fù)灌對兔缺血再灌注心肌內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與細胞凋亡的研究.pdf

1、本文分析了體外循環(huán)下低pH液復(fù)灌對兔缺血再灌注心肌內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與細胞凋亡的影響。本研究分為兩個部分：
　　 第一部分：體外循環(huán)下低pH液復(fù)灌對兔心肌缺血再灌注損傷的影響。
　　 目的：探討體外循環(huán)(cardiopulmonary bypass,CPB)下再灌注初短暫低pH液復(fù)灌對兔心肌缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)損傷的保護作用并確定灌注液的最佳pH值。
　　 方法：選擇健康成年新西

2、蘭大白兔36只,雌雄不拘,體重2.5-3.0kg,隨機分為6組(n=6):對照組(C)不阻斷主動脈,單純轉(zhuǎn)機3 h;缺血再灌注組(I/R)心臟停搏缺血40 min,再灌注2 h;其余各組心臟缺血40min,再灌注2 h,再灌注的前2 min分別給予pH值為7.4、7.1、6.9、6.7的Krebs-Henseleit液(K-H液)持續(xù)灌注至主動脈開放。實驗結(jié)束后,比色法測定心肌組織中乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase

3、,LDH)活性及酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)測定肌鈣蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)濃度;光鏡觀察心肌組織形態(tài)學改變;透射電鏡下觀察心肌組織超微結(jié)構(gòu)。
　　 結(jié)果：與對照組比較,各組心肌組織LDH活性、cTnI濃度均增加(P＜0.05),與I/R組比較,pH7.4組LDH活性及cTnI濃度差異無統(tǒng)計學意義,低pH液復(fù)灌各組LDH活性、c

4、TnI濃度均降低(P＜0.05),其中pH6.9組最低;病理學檢查示I/R組及pH7.4組損傷最為嚴重,低pH液復(fù)灌各組中pH6.9組損傷最輕。
　　 結(jié)論：體外循環(huán)下再灌注初短暫低pH液復(fù)灌產(chǎn)生心肌保護作用,且pH6.9的K-H液灌注產(chǎn)生的效果最好。
　　 第二部分：低pH液復(fù)灌對兔缺血再灌注心肌內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與細胞凋亡的影響。
　　 目的：探討CPB下再灌注初短暫低pH液復(fù)灌對兔I/R心肌內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endopl

5、asmic reticulum stress,ERS)與細胞凋亡的影響。
　　 方法：健康成年新西蘭大白兔30只,雌雄不拘,體重2.5～3.0 kg,隨機分為5組(n=6):對照組(C)不阻斷主動脈,單純轉(zhuǎn)機3 h;缺血再灌注組(I/R)心臟停搏缺血40 min,再灌注2 h;pH7.4組與pH6.9組心肌缺血40 min,再灌注2 h,再灌注前2 min分別給予pH7.4、6.9的K-H液持續(xù)灌注至主動脈開放;缺血后處理組(I

6、-postC)心肌缺血40 min后,于2 h的再灌注的前2min給予10 s再灌/10 s缺血共6次的缺血后處理。實驗結(jié)束后,比色法測定心肌組織中LDH活性;ELISA測定cTnI濃度;末端脫氧核苷?；D(zhuǎn)移酶介導(dǎo)性dUTP切口末端標記(terminal deoxynucleotidyl transferase-medialated dUTP nick end labeling,TUNEL)檢測心肌細胞凋亡情況;逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(re

7、versetranscription polymerase chain reation,RT-PCR)檢測ERS分子葡萄糖調(diào)節(jié)蛋自78(glucose-regulated protein78,GRP78)、鈣網(wǎng)蛋白(calreticulin,CRT)mRNA的表達;免疫組化及蛋白質(zhì)印跡(Western blot)檢測凋亡分子caspase-12、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)蛋白表達以及

8、透射電鏡觀察心肌組織超微結(jié)構(gòu)改變。
　　 結(jié)果：與C組比較,其余各組LDH活性、cTnI濃度、心肌細胞凋亡率、GRP78與CRTmRNA表達、以及caspase-12與CHOP蛋白表達均明顯增加(P＜0.05);與I/R組比較,pH7.4組各指標差異無統(tǒng)計學意義,各檢測指標在pH6.9組及I-postC組均降低(P＜0.05),而后兩者比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。心肌組織超微結(jié)構(gòu)觀察示C組結(jié)構(gòu)基本正常,I/R組及pH7