二聚體蝎型探針定量檢測(cè)解脲脲原體方法的建立及初步臨床應(yīng)用.pdf

1、目的：利用二聚體蝎型熒光探針技術(shù)，建立一種能廣泛應(yīng)用于臨床而且穩(wěn)定、敏感、特異的熒光定量PCR檢測(cè)解脲脲原體(UU)方法。 方法：構(gòu)建重組質(zhì)粒pMD18-T-UU-Ure作為標(biāo)準(zhǔn)品。自行設(shè)計(jì)二聚體蝎型探針，優(yōu)化定量PCR體系，并進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià)。 結(jié)果：1)成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pMD18-T-UU-Ure； 2)建立了利用二聚體蝎型熒光探針的熒光定量 PCR 方法，其線(xiàn)性檢測(cè)范圍：10<'1>-10<'7>7copies/μ

2、l；靈敏度：1copies/μl；重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果為批內(nèi)CV為3.50％，批間CV為3.93％，天間CV為3.77％；特異性：100％；與Taqman探針技術(shù)定量方法比較，結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；3)初步臨床應(yīng)用證明：該方法比利用Taqman技術(shù)建立的方法靈敏度更高，檢測(cè)時(shí)間更短和成本也明顯降低。 結(jié)論：在國(guó)內(nèi)外首次建立了以二聚體蝎型熒光探針為平臺(tái)的解脲脲原體熒光定量PCR檢測(cè)方法，為新型試劑盒的開(kāi)發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，同時(shí)也促進(jìn)新型探