2-氯丙酸脫鹵酶的分離純化.pdf

1、2-氯丙酸(2-CPA)是合成農(nóng)藥、染料、農(nóng)林和醫(yī)藥化學(xué)品等的重要原料，但是，由于2-氯丙酸具有光學(xué)活性，一般只有用(S)-構(gòu)型2-氯丙酸合成的農(nóng)藥、醫(yī)藥等才具有很高的生理活性或藥理作用，用(R)-構(gòu)型合成的農(nóng)藥活性很低或無活性，且可能以競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑的形式起作用。而(R)-構(gòu)型的2-氯丙酸在其它某些手性醫(yī)藥及其中間體的合成方面有很重要的應(yīng)用，如可用于合成抗結(jié)核病藥物硫乳霉素(thiolactomycin)。 2-氯丙酸脫鹵酶有3

2、種，分別為(S)-2-鹵酸脫鹵酶(EC3.8.1.2)、(R)-2-鹵酸脫鹵酶(EC3.8.1.9)、(R，S)-2-鹵酸脫鹵酶(EC3.8.1.10及EC3.8.1.11)。利用脫鹵酶可選擇性地高效拆分2-氯丙酸。 本文的研究目的是篩選對(duì)2-氯丙酸具有脫氯能力的菌株，并建立脫鹵酶的分離純化方法，從而為利用脫鹵酶生產(chǎn)(S)-及(R)-構(gòu)型光學(xué)活性2-氯丙酸奠定基礎(chǔ)。 本文首先從杭州、溫州、富陽等農(nóng)藥廠附近所采集的11個(gè)土

3、樣出發(fā)，篩選出了21支對(duì)2-氯丙酸具有脫鹵活性的菌株。其中H9脫鹵能力較強(qiáng)，S4和W20脫鹵酶分別對(duì)(S)-2-CPA和(R)-2-CPA具有一定的選擇性脫鹵能力。 由于(R)構(gòu)型脫鹵酶的應(yīng)用更為廣泛，因此本文重點(diǎn)針對(duì)W20脫鹵酶進(jìn)行了分離純化研究，經(jīng)過鹽析、脫鹽、離子交換層析、凝膠層析后獲得了電泳純的脫鹵酶，SDS-PAGE測(cè)定酶的分子量為35KDa。對(duì)部分酶學(xué)性質(zhì)作了考察后發(fā)現(xiàn)，W20酶的最適反應(yīng)pH值為10，最適反應(yīng)溫度為