菠蘿蜜成熟軟化相關(guān)酶基因表達(dá)及β-半乳糖苷酶基因克隆和序列分析.pdf

1、果實的成熟軟化是一個復(fù)雜的生理過程,與果實的質(zhì)地品質(zhì)發(fā)育及采后的貯藏運輸?shù)榷加兄置芮械年P(guān)系。本研究利用篩選出的內(nèi)參基因,分析了多聚半乳糖醛酸酶基因、果膠甲酯酶基因、果膠甲酯酶抑制子基因、纖維素酶基因、ɑ-半乳糖苷酶基因、β-半乳糖苷酶基因、阿拉伯呋喃糖苷酶基因、ɑ-甘露糖苷酶基因、β-甘露糖苷酶基因、ɑ-淀粉酶基因、β-淀粉酶基因和酸性蔗糖酶基因等12個基因在干苞菠蘿蜜(GHsj12D and GHsj12G)和濕苞菠蘿蜜(GHsj

2、12As and GHsj12Cs)果實成熟軟化過程中的表達(dá),并用RACE技術(shù)克隆到了β-半乳糖苷酶基因cDNA全長,并對其進(jìn)行了生物信息學(xué)分析,結(jié)果如下:
　　1)分析了5個內(nèi)參基因在不同菠蘿蜜組織中的表達(dá)穩(wěn)定性,結(jié)果表明,果實中最穩(wěn)定的3個內(nèi)參基因是UBQ、GAPDH、18S rRNA;葉片中最穩(wěn)定的3個內(nèi)參基因是UBQ、GAPDH、β-tubulin;花序中最穩(wěn)定的3個內(nèi)參基因是UBQ、GAPDH、ɑ-tubulin。

3、>　　2)基因表達(dá)分析結(jié)果顯示,ɑ-甘露糖苷酶基因、β-甘露糖苷酶基因和ɑ-淀粉酶基因可能在菠蘿蜜果實成熟軟化中起到重要作用,多聚半乳糖醛酸酶基因、果膠甲酯酶基因、果膠甲酯酶抑制子基因、纖維素酶基因、ɑ-半乳糖苷酶基因、β-半乳糖苷酶基因、阿拉伯呋喃糖苷酶基因、β-淀粉酶基因和酸性蔗糖酶基因不是導(dǎo)致菠蘿蜜果實快速成熟軟化的主要基因,其中ɑ-淀粉酶基因和β-淀粉酶基因可能與菠蘿蜜果實質(zhì)地和品質(zhì)的形成有關(guān)。
　　3)從菠蘿蜜果實中克隆

4、到β-半乳糖苷酶基因cDNA全長,分析表明,其全長為3264 bp,開放閱讀框(ORF)2574 bp,編碼857個氨基酸殘基,編碼蛋白質(zhì)預(yù)測分子量95.4538 KD,理論等電點8.88,為堿性蛋白質(zhì);該蛋白屬于糖基水解酶35家族,具有糖基水解酶和半乳糖凝集素等保守結(jié)構(gòu)域,亞細(xì)胞定位于線粒體,具有信號肽序列和多個跨膜螺旋區(qū),有19個功能位點和27個磷酸化位點(Ser12個,Thr9個,Tyr6個)。二級結(jié)構(gòu)由ɑ-螺旋、β-折疊、延伸鏈