三倍體羅漢果轉(zhuǎn)錄組表達(dá)譜分析及甜苷V生物合成中4個關(guān)鍵酶基因的功能研究.pdf

1、博士學(xué)位論文三倍體羅漢杲轉(zhuǎn)錄組表達(dá)譜分析及甜苷V 生物合成中4 個關(guān)鍵酶基因的功能研究所 院 ：姓 名 ：指導(dǎo)教師：導(dǎo)師小組：學(xué)科專業(yè)：研究方向：完成日期：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所趙歡馬小軍生藥學(xué)生物技術(shù)2 0 I ) 4 ．4T H E S I S O F P h ．D ．D E G R E EC h i n e s e A c a d e m yo f M e d i c a l S c i e n c e a n d P e

2、k i n gU n i o n M e d i c a l C o l l e g e1 ．3 ．3 ．2 @ c s 基因在羅漢果不同部位中的表達(dá)情況情況???????????7 7第四節(jié)@ c s 基因的原核表達(dá)研究?????????????????????．7 91 ．4 ．1 材料????????????????????????????????????????．．7 91 ．4 ．2 方法???????????????????

3、??????????????????????7 91 ．4 ．2 ．1 羅漢果幼果果實總R N A 的提取與第一鏈c D N A 的合成???????．7 91 ．4 ．2 ．2 @ c s 全長基因的克隆??????????????????????7 91 ．4 ．2 ．3 @ c s 基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建??????????????????8 11 ．4 ．2 ．4 @ c s 的原核表達(dá)?????????????????????

4、???8 11 ．4 ．3 結(jié)果?????????????????????????????????????????8 21 ．4 ．3 ．1 @ c s 基因的原核表達(dá)載體構(gòu)建??????????????????8 21 。4 3 。2 & C S 重組蛋白的S D S ．P A G E 分析、融合蛋白的可溶性分析、W e s t e r n B l o t檢測??????????????????????????????????

5、?????????8 3第五節(jié)利用酵母表達(dá)研究嵌c s 基因的功能?????????????????8 51 ．5 ．1 材料???????????????????????????????????????．8 51 ．5 ．2 方法????????????????????????????????????????8 51 ．5 ．2 ．1 酵母表達(dá)載體p Y E S 2 ．S g C S 的構(gòu)建????????????????8 51 ．

6、5 ．2 ．2 羅漢果p Y E S 2 一S g C S 基因轉(zhuǎn)化酵母- I V F ??????????????．．8 61 ．5 ．2 ．3 提取酵母的次生代謝產(chǎn)物????????????????????．8 71 ．5 ．3 結(jié)果???????????????????????????????8 71 ．5 ．3 ．1 重組酵母表達(dá)載體的構(gòu)建????????????????????8 71 ．5 ．3 ．2 S g C S - p

7、 Y E S 2 酵母重組質(zhì)粒在酵母菌株中的表達(dá)及檢測????????8 9第六節(jié)s g c s 基因的亞細(xì)胞定位研究????????????????????．9 21 ．6 ．1 材料???????????????????????????????????????9 21 ．6 ．2 方法?????????????????????????????????????????9 21 ．6 ．2 ．1 @ c s 基因亞細(xì)胞定位載體的構(gòu)建??

8、???????????????9 21 ．6 ．2 ．2 農(nóng)桿菌感受態(tài)的制備??????????????????????9 21 ．6 ．2 ．3 重組的亞細(xì)胞定位載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌????????????????9 31 ．6 ．2 ．4 根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化煙草葉片【1 0 】?????????????????9 31 ．6 ．3 結(jié)果?????????????????????????????????????????．9 3第七節(jié)@ c

9、s 基因植物過表達(dá)載體的構(gòu)建及根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化擬南芥的研究??．．9 41 ．7 ．1 材料???????????????????????????????????????．9 41 ．7 ．2 方法?????????????????????????????????????????9 41 ．7 ．2 ．1 @ c s 基因的植物過表達(dá)載體構(gòu)建?????????????????9 41 ．7 ．2 ．2 重組的植物過表達(dá)載體@ C S

10、- O R F ．p B l l 2 1 轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌G V 3 1 0 1 ????9 51 ．7 ．2 ．3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)重組質(zhì)粒S g C S - O R F —p B l l 2 1 轉(zhuǎn)化擬南芥?????????9 51 ．7 ．2 ．4 轉(zhuǎn)基因擬南芥的P C R 鑒定???????????????????．．9 61 ．7 ．2 ．5 轉(zhuǎn)基因擬南芥的是實時熒光定量P C R 分析????????????．．9 61 ．7 ．3 結(jié)

11、果?????????????????????????????????????????9 71 ．7 ．3 ．1 @ c s ．p B l l 2 1 植物表達(dá)載體的構(gòu)建????????????????．．9 71 ．7 ．3 ．2 轉(zhuǎn)基因擬南芥種子的篩選????????????????????9 81 ．7 ．3 ．3 轉(zhuǎn)取田基因的擬南芥表型觀察?????????????????．9 9討論???????????????????????