HMGB1誘導(dǎo)乏氧人肺腺癌A549細(xì)胞順鉑耐藥及機(jī)制.pdf

1、原發(fā)性支氣管肺癌是全世界發(fā)病率及死亡率最高的惡性腫瘤之一。肺腺癌是其中一種常見的病理類型，據(jù)統(tǒng)計(jì)，近年來在世界許多國家和地區(qū)肺腺癌的發(fā)病率已超過鱗癌，成為肺癌最常見的病理類型。然而，大多數(shù)患者確診時(shí)已屬晚期，因此，以鉑類為基礎(chǔ)的聯(lián)合長春瑞濱、吉西他濱、多西他賽以及培美曲塞等二聯(lián)化療方案是EGFR基因突變陰性及TKI治療失敗患者的首要選擇，然而，化療耐藥的出現(xiàn)嚴(yán)重影響化療效果和患者預(yù)后。腫瘤化療耐藥的機(jī)制極為復(fù)雜，其中由于實(shí)體腫瘤血管生成

2、速度常滯后于瘤細(xì)胞生長增殖的速度所形成瘤體內(nèi)乏氧微環(huán)境引起了重視。CoCl2是乏氧實(shí)驗(yàn)中常用的化學(xué)乏氧模擬劑，它能夠使細(xì)胞線粒體內(nèi)呼吸用氧障礙達(dá)到細(xì)胞乏氧的作用，近年研究發(fā)現(xiàn)腫瘤乏氧微環(huán)境下氧自由基減少可以直接影響化療藥物的作用機(jī)制，而且低氧還可以通過上調(diào)和下調(diào)一些靶基因通過多種間接途徑影響腫瘤細(xì)胞的化療敏感性。高遷移率族蛋白B1（HMGB1）是細(xì)胞在周圍乏氧、慢性炎及腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞激活后產(chǎn)生的多種損傷相關(guān)模式分子中最重要的一種，不

3、僅在多種腫瘤細(xì)胞中參與侵襲和轉(zhuǎn)移，而且近期有學(xué)者在白血病的一項(xiàng)研究中發(fā)現(xiàn)，HMGB1可能通過活化P13KC3-MEK-ERK1/2信號途徑上調(diào)LC3-II表達(dá)及增加p62的降解調(diào)節(jié)自噬影響腫瘤細(xì)胞的化療耐藥性。實(shí)體瘤乏氧環(huán)境下 HMGB1釋放明顯增多，而目前研究發(fā)現(xiàn)HMGB1與腫瘤化療耐藥關(guān)系密切，那么乏氧環(huán)境下肺癌細(xì)胞化療耐藥的產(chǎn)生是否與HMGB1相關(guān)及其具體機(jī)制目前尚不清楚。
　　目的：通過建立人肺腺癌A549細(xì)胞化學(xué)乏氧模型

4、，探討乏氧條件下HMGB1對A549細(xì)胞順鉑化療敏感性的影響及其機(jī)制。
　　方法：人肺腺癌A549細(xì)胞在CoCl2(0、200μM)中培養(yǎng)24小時(shí)后，首先通過細(xì)胞免疫化學(xué)檢測HIF-1α的表達(dá)來驗(yàn)證乏氧模型是否成功建立。然后，通過倒置相差顯微鏡觀察A549細(xì)胞的形態(tài)，MTT法檢測A549細(xì)胞的生長、增殖情況，ELISA檢測化學(xué)乏氧條件下人肺腺癌 A549細(xì)胞上清液中 HMGB1蛋白的含量，CCK-8法測定化學(xué)乏氧條件下順鉑作用時(shí)

5、A549細(xì)胞活性，進(jìn)一步通過Western-blot檢測自噬基因Beclin-1及LC3-II蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：⑴CoCl2乏氧組HIF-1α陽性 A549細(xì)胞陽性積分及細(xì)胞核中HIF-1α蛋白表達(dá)均較常氧組增高；⑵倒置相差顯微鏡下CoCl2乏氧組與常氧組A549細(xì)胞均貼壁良好，CoCl2乏氧組A549細(xì)胞數(shù)目較常氧組稀疏，部分形態(tài)不規(guī)則，可見多個偽足形成；⑶與常氧組A549細(xì)胞相比，CoCl2乏氧組A549細(xì)胞生長曲線較為

6、低平、增殖速度緩慢；⑷經(jīng)順鉑處理后，CoCl2乏氧組 A549細(xì)胞存活率較常氧組A549細(xì)胞增高；⑸ELISA檢測結(jié)果顯示CoCl2乏氧組oCl2組A549細(xì)胞上清液中HMGB1蛋白的表達(dá)較常氧組A549細(xì)胞增加；⑹抑制HMGB1蛋白的活性能夠增加CoCl2乏氧組A549細(xì)胞順鉑化療敏感性，而加入外源性HMGB1使CoCl2乏氧組A549細(xì)胞順鉑化療敏感性降低；⑺CoCl2乏氧組A549細(xì)胞中Beclin-1及LC3-II蛋白的表達(dá)隨H