PARP-1抑制劑對卵巢癌耐藥細胞C13-生長活性及耐藥性的影響.pdf

1、背景和目的
　　 卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)中病死率最高的惡性腫瘤，其發(fā)病率呈緩慢上升的趨勢[1]。絕大部分患者缺乏早期癥狀、就診時70％已為晚期，并伴有腹盆腔的廣泛轉移。晚期卵巢癌的主要治療方式為理想的腫瘤細胞減滅術加以鉑類為主的輔助化療[2]。然而順鉑作為最常用的一線化療藥物，對其產生原發(fā)或繼發(fā)耐藥性是卵巢癌治療的主要障礙，也是晚期卵巢癌患者五年生存率幾乎難以超過30％的主要原因之一[3]。
　　 目前關于卵巢癌的順鉑耐藥

2、機制的研究成為腫瘤治療的難點與熱點。順鉑是細胞周期非特性抗腫瘤藥物[4，5]，細胞毒作用主要是形成鉑-DNA加合物，從而破壞DNA的結構和復制功能，導致DNA斷裂和編碼錯誤[6]。DNA修復是細胞遺傳基礎穩(wěn)定性的關鍵，DNA修復能力增強是導致腫瘤細胞耐藥的主要原因[7,8]，并發(fā)現聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶-1[Poly(ADP-ribose)polymerase-1，PARP-1]在DNA損傷修復發(fā)揮重要作用。PARP-1是存在于哺乳動

3、物中的翻譯后修飾酶，在保持染色體結構完整、參與DNA復制和轉錄、維持基因組穩(wěn)定和細胞凋亡過程中發(fā)揮著關鍵作用[9,10]。PARP-1在細胞中以非活性形式大量存在，輻射、化療藥物等導致DNA損傷后，DNA鏈的缺口或游離的DNA末端將其激活，PARP-1檢測到DNA斷鏈末端并與之結合后，將參與DNA損傷修復的蛋白迅速募集到損傷位點，一方面對DNA斷鏈予以修復，另一方面保護裸露的DNA末端免遭核酸酶的降解[11,12]。
　　 本研

4、究欲通過選用不同濃度新型高效PARP抑制劑PJ34處理卵巢癌順鉑耐藥細胞株C13*，探討該藥物對C13*細胞生長活性及對順鉑敏感性的影響，為PARP-1抑制劑的臨床應用提供理論指導。
　　 方法
　　 1、應用四甲基偶氮唑藍(MTT)檢測PJ34對C13*細胞增殖活性及順鉑敏感性的影響;
　　 2、采用流式細胞術檢測PJ34對C13*細胞凋亡和細胞周期的影響;
　　 3、免疫熒光技術及蛋白印跡法(West

5、ernblot)檢測PJ34處理前后PARP-1的表達及定位情況。
　　 結果
　　 1.PJ34對C13*細胞增殖及耐藥的影響MTT結果顯示當順鉑濃度不變時，隨著PJ34濃度的增加，C13*細胞增殖抑制率明顯增強(P＜0.05)，PJ34濃度固定時，隨著順鉑濃度的增加，C13*細胞增殖抑制率明顯增強(P＜0.05)。
　　 2.PJ34對C13*細胞凋亡率及周期的影響細胞凋亡率隨PJ34濃度的增加而增高(P＜0

6、.05);周期為PJ34濃度越高，G0/G1期細胞越多，S期細胞越少。
　　 3.PJ34對C13*細胞內PARP-1蛋白的表達及其定位的影響免疫熒光化學結果顯示PARP-1蛋白主要位于細胞核內，少部分位于細胞漿中，當PJ34作用細胞后，細胞內蛋白表達明顯減少。
　　 4.PARP-1蛋白的表達C13*細胞經0，1，5μmmol/LPJ34及順鉑2.5μg/mL+PJ345μmmol/L處理24小時后，PARP-1蛋白表

7、達量分別為0.98±0.03，0.78士0.01，0.43士0.04和0.12+0.01，C13*細胞中PARP-1蛋白表達隨PJ34濃度增高而降低(P＜0.05)，當順鉑與PJ34共同作用后C13*細胞中PARP-1蛋白表達降低更加明顯（P＜0.01）。
　　 結論
　　 1、PJ34可抑制C13*細胞增殖，能夠明顯增強順鉑對C13*細胞的化學毒性，提高其對順鉑的敏感性。
　　 2、PJ34能促進C13*細胞凋