RNA干擾抑制人肺腺癌耐藥細胞A549-DDP的ERCC2基因表達的研究.pdf

1、目的：探討RNA干擾技術沉默切除修復交叉互補基因組2(Excision repair crosscom-plimentary group2，ERCC2)在人肺腺癌耐藥細胞A549/DDP中的表達，為非小細胞肺癌的基因治療提供實驗依據(jù)。
　　 方法：體外設計及合成靶向人的ERCC2基因的小干擾RNA(siRNA)，包括：ERCC2-siRNA1、ERCC2-siRNA2、ERCC2-siRNA3、ERCC2-siRNA4和陰性對照

2、組(NCERCC2-siRNA)，構建攜帶ERCC2-shRNA的質粒表達載體，通過陽離子聚合物EndoFectinTM Lenti轉染人肺腺癌耐藥細胞株A549/DDP中，用熒光顯微鏡觀察并測定轉染效率；real-time PCR檢測轉染后ERCC2mRNA的表達情況。
　　 結果：1、A549/DDP細胞轉染后48h，在熒光顯微鏡下觀察到各轉染組均有不同比例的eGFP表達，空白對照組無eGFP表達，轉染效率最佳的是ERCC2

3、-siRNA2(83.45±3.27％)。2、分別于轉染24h、36h、48h后收獲細胞，用real-time PCR檢測不同ERCC2-siRNA片段轉染A549/DDP細胞后ERCC2mRNA的表達情況。轉染24h后，ERCC2mRNA相對表達量在ERCC2-siRNA1組為(0.821±0.112)、ERCC2-siRNA2組為(0.452±0.087)、ERCC2-siRNA3組為(0.591±0.127)、ERCC2-siRN

4、A4組為(0.785±0.135)，其與空白對照組、NC ERCC2-siRNA組比較，ERCC2mRNA表達均下調，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，而ERCC2-siRNA2組有顯著差異(P<0.01)；轉染36h后，ERCC2mRNA相對表達量在ERCC2-siRNAl組為(0.818±0.101)、ERCC2-siRNA2組為(0.358±0.097)、ERCC2-siRNA3組為(0.576±0.081)、ERCC2-siRNA4

5、組為(0.772±0.174)，其與空白對照組、NC ERCC2-siRNA組比較，ERCC2mRNA表達均下調，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，而ERCC2-siRNA2組有顯著差異(P<0.01)；轉染48h后，ERCC2mRNA相對表達量在ERCC2-siRNA1組為(0.813±0.183)、ERCC2-siRNA2組為(0.293±0.118)、ERCC2-siRNA3組為(0.564±0.086)、ERCC2-siRNA4組為

6、(0.763±0.078)，其與空白對照組、NC ERCC2-siRNA組比較，ERCC2mRNA表達均下調，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，而ERCC2-siRNA2組有顯著差異(P<0.01)。
　　 結論：1本實驗設計及合成的質粒表達載體可被陽離子聚合EndoFectinTMLenti成功轉染人肺腺癌耐藥細胞A549/DDP中。2 RNA干擾技術可部分下調人肺腺癌耐藥細胞A549/DDP中ERCC2mRNA基因表達水平。3構