黑木耳核糖體失活蛋白的分離純化與性質(zhì)研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、核糖體失活蛋白(ribosome-inactivating protein,RIP)是一類廣泛存在于植物界中的毒蛋白，具有獨特的酶學機制和生物學功能。目前報道的RIP大多來自高等植物，在食用菌中也有一些發(fā)現(xiàn)。本實驗運用多種蛋白質(zhì)純化技術，成功地從黑木耳菌絲體中分離得到RIP，并對其性質(zhì)和活性進行鑒定。分別通過纖維素DE-52陰離子交換層析、Affi-gel blue親合層析、Sephadex G-75凝膠過濾層析三種層析方法逐步純化RI

2、P，在每步純化之后，用紫外測定法、SDS-PAGE電泳法和家兔網(wǎng)織紅細胞裂解液體外翻譯等方法對所得蛋白的含量、分子量及對蛋白質(zhì)體外合成抑制活性進行測定，將有抑制作用活性的目的蛋白混合物繼續(xù)純化，最終分離得到高純度的黑木耳核糖體失活蛋白G2。高效液相色譜檢測其純度達99.3％。然后對此RIP進行RNA N-糖苷酶活性檢測和抑制蛋白質(zhì)體外翻譯合成活性檢測，二者均呈陽性反應，從而證明G2為黑木耳核糖體失活蛋白，是一種新發(fā)現(xiàn)的蛋白，為真菌蛋白質(zhì)

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