HIV-1 DNA疫苗sPD-1-ENV的研制.pdf

1、人類免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus, HIV）在1981年首次被發(fā)現(xiàn)，從發(fā)現(xiàn)到現(xiàn)在HIV的傳播速率飛快以至于在全世界蔓延開(kāi)來(lái)。截止目前，尚未研制出藥效顯著且成本低廉的HIV藥物，研發(fā)預(yù)防和治療HIV的有效藥物成為各國(guó)的研究熱點(diǎn)。從抑制病毒復(fù)制和延長(zhǎng)患者生存時(shí)間的角度看高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法（Highly active anti-retroviral therapy，HAART）有著較好的效果，卻有副

2、作用大、價(jià)格昂貴，容易產(chǎn)生耐藥性等缺點(diǎn)。相對(duì)而言，在 HIV感染前采取預(yù)防措施是一種十分經(jīng)濟(jì)有效的途徑。根據(jù)對(duì)以往流行的傳染病控制的經(jīng)驗(yàn)，針對(duì)HIV傳染的有效HIV疫苗則成為首選。
　　抗原刺激淋巴細(xì)胞活化時(shí)程序性死亡因子1（PD-1，programmed death-1）被誘導(dǎo)表達(dá)，其是一個(gè)表達(dá)在T細(xì)胞表面的免疫抑制性受體。PD-1的配體(PD-L)對(duì)靜息T細(xì)胞起著共刺激作用，T細(xì)胞上的PD-1受體被誘導(dǎo)表達(dá)時(shí)，PD-L與PD-

3、1結(jié)合而介導(dǎo)免疫負(fù)調(diào)控，使免疫反應(yīng)不至于過(guò)度。所以，PD-1的配體特別是 PD-L1在維持外周免疫耐受過(guò)程中占據(jù)著重要的地位。
　　運(yùn)用可溶性PD-1（sPD-1）與PD-L1結(jié)合在DNA疫苗對(duì)于抗原遞呈和T Cell信號(hào)途徑探究有重要作用，通過(guò)此途徑不僅能夠提高機(jī)體的抗原攝入量，有效減少免疫次數(shù)和降低抗原使用量，而且可以增強(qiáng)免疫效果，有助于減輕患者因?yàn)橹委煄?lái)的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)且增強(qiáng)病人的適應(yīng)性。另外，這個(gè)信號(hào)通路能夠快速有效提高機(jī)體效

4、應(yīng)記憶性CD8+T細(xì)胞誘導(dǎo)的免疫記憶應(yīng)答的速度，這在早期有效保護(hù)機(jī)體免受病毒的入侵中起著關(guān)鍵的作用，同時(shí)也給研制抗HIV的DNA疫苗供應(yīng)新思路?；贖IV包膜糖蛋白（Env）的抗體有可能會(huì)成為HIV保護(hù)性抗體，并且廣譜中和抗體與Env相互作用才可以有效抑制HIV感染。用HIV Env作為抗原的疫苗，能夠有效刺激免疫細(xì)胞產(chǎn)生高滴度抗 Env抗體，同時(shí)引起較強(qiáng)的細(xì)胞免疫。將sPD-1與Env基因融合，構(gòu)建HIV DNA疫苗，樹(shù)突細(xì)胞通過(guò)PD

5、-1特異性攝入HIV Env抗原，避免Env結(jié)合B細(xì)胞所導(dǎo)致的體液免疫抑制；運(yùn)用樹(shù)突細(xì)胞能將抗原交錯(cuò)遞呈CD8和CD4細(xì)胞的功能，可以增強(qiáng)體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答的有效性。
　　本文旨在構(gòu)建并表達(dá)含有小鼠sPD-1和HIV-1 ENV的DNA疫苗，并建立相應(yīng)的生產(chǎn)工藝與純化工藝，確定檢測(cè)方法，為該疫苗的中試生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。目前構(gòu)建并表達(dá)成功四種質(zhì)粒，初步摸索總結(jié)出培養(yǎng)基配制比例，發(fā)酵條件，純化方式的選擇，并且建立相應(yīng)的檢測(cè)和質(zhì)量控制方