體外磁場定向遷移的間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)脊髓損傷的治療和GAP-43表達(dá)的影響.pdf

1、目的:探討體外磁場定向遷移尾靜脈注射的SPIO標(biāo)記的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)對(duì)大鼠脊髓損傷治療的影響以及對(duì)脊髓組織中GAP-43表達(dá)的影響。
　　方法:①全骨髓培養(yǎng)法獲取SD大鼠骨髓中的BMSCs，流式細(xì)胞儀檢測其免疫標(biāo)記物CD29、CD45、CD54的表達(dá)。②超順磁氧化鐵顆粒(SPIO)標(biāo)記BMSCs，普魯士蘭染色測定SPIO標(biāo)記率。③臺(tái)盼蘭染色檢測標(biāo)記細(xì)胞存活率，CCK-8檢測標(biāo)記細(xì)胞分裂增殖能力。④建立大鼠脊髓損傷

2、(SCI)模型，尾靜脈注射移植細(xì)胞。⑤細(xì)胞移植后3d、7d，分別對(duì)大鼠進(jìn)行BBB評(píng)分，普魯士藍(lán)染色觀察脊髓組織內(nèi)標(biāo)記細(xì)胞含量。⑥TTC染色觀察脊髓缺血損傷面積，Western Blot檢測損傷脊髓內(nèi)GAP-43表達(dá)情況。
　　結(jié)果:①在體外，通過分離、培養(yǎng)、傳代，能成功獲得較穩(wěn)定的BMSCs，且流式細(xì)胞儀檢測表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記物CD29、CD54，不表達(dá)造血干細(xì)胞標(biāo)記物CD45。②普魯士藍(lán)染色顯示SPIO標(biāo)記BMSCs成功率接近

3、100％。③臺(tái)盼蘭染色顯示SPIO標(biāo)記細(xì)胞生存率與對(duì)照組無差異。CCK-8檢測磁場下標(biāo)記細(xì)胞增殖活性不受影響。④磁鐵組大鼠BBB評(píng)分明顯優(yōu)于對(duì)照組。普魯士藍(lán)染色觀察磁鐵組脊髓組織中BMSCs明顯多于無磁場組。⑤TTC染色顯示磁鐵組缺血面積小于無磁鐵組。Western Blot檢測脊髓組織中同一時(shí)間點(diǎn)GAP-43表達(dá)，磁場組明顯大于對(duì)照組及無磁場組。
　　結(jié)論:①SPIO可以有效地標(biāo)記BMSCs，且對(duì)其生存、增殖沒有負(fù)面影響。②外置