動(dòng)脈粥樣硬化斑塊易損性與RANTES的相關(guān)性研究.pdf

1、第一部分，目的：觀察γ干擾素（interferon-γ，IFNγ）和CD40配體（CD40ligand, CD40L）刺激下，大鼠血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cells,vsMCs）發(fā)生鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶（calcineurin, CaN）依賴的凋亡及其受激活調(diào)節(jié)正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子（Regulatedon Activated NormAlT-Cell Expressed and Secreted, R

2、ANTES）表達(dá)水平的關(guān)系。
　　 方法：
　　 采用組織貼塊法體外原代培養(yǎng)大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞，并隨機(jī)分為6組。A組：DMEM 培養(yǎng)基培養(yǎng)24h；B組和C組：分別在培養(yǎng)基中加入大鼠重組INFγ (rINFγ,20ng/ml）和重組CD40L (rCD40L, 100ng/ml) 培養(yǎng)24h；D組：在培養(yǎng)基中同時(shí)加入rIFNγ及rCD40L（劑量同前）培養(yǎng)24h；E組：給予CaN 抑制劑FK506(10ng/ml)預(yù)培

3、養(yǎng)1h后再按D組條件培養(yǎng)24h；F組：給予RANTES的小干擾RNA(siRNA)轉(zhuǎn)染6h后再按D組條件培養(yǎng)24h。收集細(xì)胞用Western Blot 檢測(cè)CaN表達(dá)水平；酶化學(xué)法檢測(cè)CaN 活性，提取細(xì)胞RNA 采用RT-PCR 檢測(cè)RANTES的mRNA表達(dá)；ELISA 法檢測(cè)上清中RANTES濃度，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面CD40表達(dá)及VSMCs 凋亡。
　　 結(jié)果：
　　 通過CD40-CD40L信號(hào)通路，rINF

4、γ和rCD40L的聯(lián)合刺激強(qiáng)烈地誘導(dǎo)了VSMCs內(nèi)CaN的合成和活力以及RANTES的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。但在上述炎癥因子刺激下，與VSMCs 凋亡率呈持續(xù)正相關(guān)的是RANTES 轉(zhuǎn)錄和表達(dá)水平(P<0.01)，而不是CaN 活力(P>0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 炎癥因子IFNγ和CD40L 可能通過調(diào)節(jié)RANTES的表達(dá)及分泌，調(diào)控了CaN 依賴的VSMCs 凋亡。
　　 第二部分，目的：研究血漿和斑塊局部受激活

5、調(diào)節(jié)正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(Regulated onActivated NormAlT Cell Expressed and Secreted, RANTES)表達(dá)水平與兔動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells,vsMCs)凋亡程度的相關(guān)性。
　　 方法：
　　 40只雄性家兔隨機(jī)分為：(1)空白組（Blank組，10只）和(2)對(duì)照組（Control組，10只）：均

6、普通飼料喂養(yǎng)16W；(3)穩(wěn)定斑塊組(AS組，10只)和(4)易損斑塊組（VAP組，10只）：均高脂飲食（含膽固醇1％和豬油5％）喂養(yǎng)16W。Control和VAP組于16W 處死前24和48h 給予兩次藥物觸發(fā)（蝰蛇毒+組織胺），Blank和AS組于16W處死前按上述時(shí)間、劑量、給藥方法注射生理鹽水。測(cè)定0W、16W 各組血脂和血漿RANTES水平，ReAlTime-PCR和Western Blot 檢測(cè)主動(dòng)脈RANTES 轉(zhuǎn)錄和表達(dá)

7、水平，TUNEL 染色后計(jì)算各組斑塊VSMCs 凋亡率及其與RANTES水平的相關(guān)系數(shù)。
　　 結(jié)果：
　　 高脂喂養(yǎng)的家兔血脂較普通喂養(yǎng)組明顯升高(P<0.01)。VAP組RANTES 轉(zhuǎn)錄翻譯水平和凋亡率明顯高于AS組(P<0.01)、control組(P<0.01）和blank組（P<0.01）；AS組明顯高于control組(P<0.01)和blank組(P<0.01)；但AS組和control組間無顯著性差異(

8、P>0.05）。各組的VSMCs 凋亡率與RANTES 轉(zhuǎn)錄翻譯水平均成正相關(guān)(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 RANTES過表達(dá)可能通過加重斑塊局部的炎癥反應(yīng)而誘導(dǎo)了斑塊內(nèi)VSMCs凋亡。
　　 第三部分，目的：研究血漿和斑塊局部受激活調(diào)節(jié)正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(Regulated onActivated NormAlT Cell Expressed and Secreted, RANTES)水平與家兔

9、動(dòng)脈粥樣硬化斑塊易損性的關(guān)系。
　　 方法：
　　 40只雄性家兔隨機(jī)分為：(1)空白組（Blank組，10只）和(2)對(duì)照組（Control組，10只）：均普通飼料喂養(yǎng)16W；(3)穩(wěn)定斑塊組(AS組，10只)和(4)易損斑塊組（VAP組，10只）：均高脂飲食（含膽固醇1％和豬油5％）喂養(yǎng)16W。Control和VAP組于16W 處死前24和48h 給予兩次藥物觸發(fā)（蝰蛇毒+組織胺），Blank和AS組于16W處死前按

10、上述時(shí)間、劑量、給藥方法注射生理鹽水。測(cè)定0W、16W 各組血脂和血漿RANTES水平，檢測(cè)16W 各組斑塊局部易損指數(shù)和校正的斑塊面積、核因子-κB(nuclear factor-κB, NF-κB)和RANTES的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)水平，計(jì)算易損指數(shù)和校正的斑塊面積與RANTES 轉(zhuǎn)錄和表達(dá)水平的相關(guān)性。
　　 結(jié)果：
　　 高脂喂養(yǎng)組的血脂較普通喂養(yǎng)組明顯升高(P<0.01)；Blank和Control組間的RANTES及