阻斷JAK2-STAT3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對大鼠急性脊髓損傷中細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用的影響.pdf

1、第一部分：專用大鼠脊髓損傷模型的建立及穩(wěn)定性測定
　　目的：設(shè)計制造一種簡易、穩(wěn)定的Allen’s大鼠脊髓打擊器，并評估其制作大鼠脊髓損傷模型的參數(shù)和穩(wěn)定性，為脊髓損傷的研究提供基礎(chǔ)。
　　方法:分為篩選打擊沖量和穩(wěn)定性評估兩個實驗步驟。取體重220g-250g的雄性SD大鼠48只，步驟一取大鼠30只，每6只一組用重物墜落打擊方法，分別用撞針(7g)從0cm、3cm、6cm、9cm、12cm高度進(jìn)行打擊，0cm組為對照組，僅

2、打開椎板。打擊后通過行為學(xué)評分和病理切片HE染色確定出能夠造成較明顯脊髓不完全損傷的高度（6cm組和9cm組）；步驟二取18只大鼠（對照組、6cm組、9cm組各6只）以與步驟一相同的方法造模，后將步驟一與步驟二中對照組、6cm組和9cm組共36只的數(shù)據(jù)匯總進(jìn)行穩(wěn)定性及效果評估。
　　結(jié)果：打擊后24hBBB評分對照組大鼠與手術(shù)前正常大鼠相同，HE染色見對照組脊髓無可見損傷。脊髓損傷各打擊沖量組（沖量=高度×主動撞針質(zhì)量）術(shù)后BBB

3、評分相對于術(shù)前有不同程度降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）,HE染色可見灰、白質(zhì)組織結(jié)構(gòu)不完整,損傷區(qū)可見壞死灶、細(xì)胞腫脹及紅細(xì)胞聚集。大鼠脊髓最大受損面積比在6cm高度(42g.cm沖量)組和9cm高度（63g.cm沖量）組組內(nèi)差異較?。–V<10％）、組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05),脊髓最大受損面積比與BBB評分呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.851，p=0.000)。
　　結(jié)論:本研究研制的大鼠脊髓打擊器可成功建立不同損傷

4、程度的穩(wěn)定性高、重復(fù)性好的大鼠急性脊髓挫傷模型,可為后續(xù)大鼠脊髓損傷的研究提供有效的支持。
　　目的：1、運用HE染色和TUNEL凋亡檢測方法，探討大鼠脊髓損傷后發(fā)生凋亡的細(xì)胞的數(shù)量，及應(yīng)用不同劑量JAK2/STAT3信號傳導(dǎo)通路阻斷劑AG490對脊髓形態(tài)和凋亡細(xì)胞的數(shù)量的影響。
　　2、運用westernblot實驗方法，檢測不同劑量的AG490對P-STAT3(磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3)和P-JAK2(磷酸化蛋白酪

5、氨酸激酶2)的表達(dá)數(shù)量的影響。
　　3、探討不同程度的阻斷JAK2/STAT3信號傳導(dǎo)通路對于大鼠急性脊髓損傷（acute spinal cord injury，ASCI）的細(xì)胞凋亡的影響及其相關(guān)性。
　　方法：采用健康成年雄性SD大鼠60只。體重220-250g，分為假手術(shù)對照組（E組，n=12）,脊髓損傷組（A組，n=12）,脊髓損傷＋AG490干預(yù)組：5mg/kg體重組（B組，n=12）、10mg/kg體重組（C組，n

6、=12）和15mg/kg體重組（D組，n=12）五組。應(yīng)用基于 ALLEN’S重物墜落法研發(fā)的“專用大鼠脊髓打擊器”制作大鼠急性脊髓損傷模型，假手術(shù)組僅切除等大的椎板不損傷脊髓。術(shù)前及術(shù)后24h記錄BBB評分，術(shù)后24h將大鼠處死，每組取6只做石蠟包塊進(jìn)行HE染色和TUNEL凋亡檢測，另6只取新鮮組織進(jìn)行westernblot實驗檢測P-JAK2和P-STAT3的表達(dá)變化。繪制P-JAK2，P-STAT3含量與凋亡數(shù)目相關(guān)關(guān)系圖。

7、>　　結(jié)果：成功建立穩(wěn)定的ASCI模型并獲得滿意的脊髓組織標(biāo)本。HE染色顯示脊髓組織損傷程度在各組間無明顯差異（P>0.05）；TUNEL檢測顯示對照組凋亡細(xì)胞很少，損傷組凋亡細(xì)胞最多，AG490干預(yù)的損傷組凋亡細(xì)胞數(shù)隨 AG490劑量增大而減少；westernblot檢測顯示A、B、C、D四組中P-JAK2和P-STAT3含量隨AG490劑量增大而降低，各組間存在明顯差異（p<0.05）,組內(nèi)數(shù)據(jù)差異較?。≒>0.05）,無統(tǒng)計學(xué)意義