分泌蛋白OIF在HPA軸中的功能研究.pdf

1、骨生成誘導因子(OIF)是一種分泌蛋白，屬小亮氨酸富集蛋白家族。目前的研究主要集中在對其結構、轉錄調節(jié)以及與腫瘤的發(fā)生關系上，這些研究提示OIF蛋白可能具有重要的生理功能，但具體的生理功能尚不明確。
　　 本課題組首次從人垂體組織中克隆了人OIF全長cDNA，并公布于GenBank;獲得了OIF的原核表達蛋白，制備了針對OIF的多克隆抗體及單克隆抗體。我們的研究同時發(fā)現(xiàn)，OIF在腎上腺組織中有較高表達，由于垂體-腎上腺在機體應激

2、過程中發(fā)揮重要作用，故而本實驗對OIF在下丘腦-垂體-腎上腺(hypothalamuspitutary-adrenal，HPA)軸中的調控作用進行研究，以明確OIF的主要生理功能。
　　 第一部分中。我們首先通過各組織篩查，發(fā)現(xiàn)OIF在肺和腎上腺組織表達較高，在垂體中也有一定的表達。采用原位雜交、免疫組化的方法，發(fā)現(xiàn)其在腎上腺的表達主要位于皮質細胞中，這為我們進一步研究OIF的功能奠定了基礎。在燙傷應激、低血糖應激時，North

3、ernblot分析發(fā)現(xiàn)，應激狀態(tài)下腎上腺皮質OIF表達水平下降，但肺組織中OIF表達不變，這提示OIF可能參與了HPA軸的調節(jié)。進一步研究發(fā)現(xiàn)，腹腔注射促腎上腺皮質激素(ACTH)抑制腎上腺OIF表達的表達，肌肉注射地塞米松(DEX)促進其表達。在腎上腺Y1細胞上，我們發(fā)現(xiàn)ACTH以時間和劑量依賴性的抑制OIF的表達，而地塞米松則時間和劑量依賴性的促進OIF的表達，同時，我們在原代培養(yǎng)的腎上腺細胞上部分重復了這些結果，這些結果提示OIF

4、在HPA軸的調控中可能起重要作用。通過在腎上腺Y1細胞上加入PKA抑制劑H89、cAMP抑制劑SQ22536、PKC抑制劑G06839、JNK抑制劑SP600125、Erk抑制劑pd98059及U0126的方法，我們發(fā)現(xiàn)ACTH抑制OIF是通過Erk途徑，而排除了其他四種途徑。腹腔注射OIF蛋白后，我們發(fā)現(xiàn)小鼠血漿皮質酮的水平明顯升高，在Y1細胞上我們加入OIF蛋白后，同樣發(fā)現(xiàn)皮質酮的分泌被促進。這提示OIF蛋白在受到HPA軸調控的同時

5、，也參與了對HPA軸的調控，這拓展了人們對機體應激、HPA軸復雜調控網(wǎng)絡的認識。
　　 第二部分中，我們采用OIF基因敲除小鼠模型，進一步證實了OIF在HPA軸中的重要作用。
　　 我們發(fā)現(xiàn)OIF基因敲除鼠，腎上腺皮質束狀帶的脂滴沉積發(fā)生改變，這提示OIF可能參與了腎上腺皮質脂質的代謝，影響了皮質酮的合成。OIF基因敲除鼠的皮質酮晝夜節(jié)律也發(fā)生改變；在饑餓應激、CRH興奮試驗時，ACTH的升高水平發(fā)生異常，而皮質酮水平與

6、野生鼠相比卻未見相應的改變，這提示OIF可能也參與了HPA軸垂體水平的調節(jié)，同時也提示OIF在腎上腺水平對于皮質酮的分泌起到重要作用，在ACTH水平相對降低的情況下，皮質酮的水平卻沒有改變；在地塞米松抑制試驗中，ACTH水平被抑制程度無明顯異常的情況下，皮質酮水平卻被更為明顯地抑制，這可能是由于缺少OIF對皮質酮的正向調控的原因；ACTH興奮實驗中，OIF基因敲除鼠的皮質酮水平與野生型鼠比較無明顯差異，這可能是因為ACTH抑制OIF的表