線粒體蛋白QCR2降解p53促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展.pdf

1、目的:目前為止,p53仍然是作用最為廣泛和最為重要的抑癌基因[1].有超過一半的惡性腫瘤(宮頸癌等)中發(fā)生有 p53的功能失活或者蛋白量降低[2-4].作為轉(zhuǎn)錄因子，p53能夠調(diào)控很多基因的表達(dá)水平，如p21，Bax等[5],進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞在多方面的生物學(xué)行為，如增殖，轉(zhuǎn)移，代謝等。深入挖掘調(diào)控p53的機(jī)制和重建p53蛋白的功能活性，仍然是目前全世界最為關(guān)注的課題之一。p53可以通過調(diào)控相關(guān)基因表達(dá)來調(diào)控細(xì)胞內(nèi)線粒體數(shù)量與代謝活性[6]，

2、但是目前仍然沒有足夠的證據(jù)能夠證實(shí)線粒體蛋白能夠影響p53的狀態(tài)。而在我們前期研究中，發(fā)現(xiàn)線粒體蛋白UQCRC2(QCR2)參與調(diào)控了腫瘤細(xì)胞的TSA化療敏感性[7]。QCR2是線粒體氧化磷酸化復(fù)合體三的重要組成部分。現(xiàn)在尚未有足夠的證據(jù)證實(shí)QCR2的表達(dá)水平與腫瘤發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系。本文主要從我們發(fā)現(xiàn)的QCR2對(duì)p53蛋白穩(wěn)定性的調(diào)控作用這一方向入手，探索線粒體蛋白QCR2在腫瘤中所扮演的角色。
　　方法：免疫組織化學(xué)證實(shí) QC

3、R2在多種腫瘤組織中高表達(dá)，CCK8細(xì)胞活力檢測(cè)，EDU細(xì)胞增殖檢測(cè)，細(xì)胞克隆形成探索 QCR2對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)周期檢測(cè)QCR2對(duì)周期的影響。Western Blot證實(shí)QCR2調(diào)控p53蛋白水平,實(shí)時(shí)熒光定量PCR法證實(shí)QCR2水平對(duì)p53的mRNA水平不具有調(diào)控作用，蛋白免疫共沉淀方法研究p53的泛素化水平和尋找QCR2的相互作用蛋白以探索QCR2調(diào)控p53蛋白水平的機(jī)制，質(zhì)譜鑒定QCR2相互作用蛋白。Nod-S

4、cid小鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)研究QCR2及PHB對(duì)腫瘤細(xì)胞成瘤能力的影響。
　　結(jié)果：QCR2在肺癌組織、肝癌組織、乳腺癌組織、甲狀腺癌組織、宮頸癌組織、食管癌組織、前列腺癌組織中的表達(dá)量都較相對(duì)應(yīng)的正常組織高。下調(diào) QCR2表達(dá)后腫瘤細(xì)胞發(fā)生G0/G1期阻滯，腫瘤細(xì)胞增殖變慢。而干擾QCR2后p53及其下游p21的蛋白量呈現(xiàn)明顯累積。后期實(shí)驗(yàn)證實(shí)QCR2能夠促進(jìn)p53泛素化，進(jìn)而負(fù)向調(diào)控p53蛋白水平。p21作為p53的下游，也隨之變

5、化。經(jīng)證實(shí)，QCR2是通過調(diào)控PHB入核及PHB與p53的相互作用來調(diào)控p53的蛋白水平的。皮下成瘤實(shí)驗(yàn)證明QCR2能夠促進(jìn)腫瘤生長而PHB能夠抑制腫瘤生長。而大量宮頸癌標(biāo)本的免疫組化染色證實(shí)QCR2的表達(dá)量與p21的表達(dá)量成負(fù)相關(guān)，而PHB的表達(dá)量與p21的表達(dá)量成正相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1.作為線粒體復(fù)合體三的重要組成蛋白，QCR2在多種腫瘤組織中表達(dá)量增高。
　　2. QCR2能夠促進(jìn)p53泛素化，從而負(fù)向調(diào)控