Id-1蛋白與腫瘤發(fā)生、發(fā)展關(guān)系的研究.pdf

1、中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文Id1蛋白與腫瘤發(fā)生、發(fā)展關(guān)系的研究姓名：金日天申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：病理及病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：劉玉琴2003.6.1中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文由于基因插入突變，染色體重排，擴(kuò)增，點(diǎn)突變和缺失引起的。因此IdI作為癌基因的證據(jù)不足。為研究Id—I基因在惡性和良性細(xì)胞系中是否存在調(diào)控上的差別，特選擇了本組自己建立或本組保存的具有不同轉(zhuǎn)移潛能、不同分化程度的腫瘤細(xì)胞系，觀察了Idl蛋白表達(dá)的血清依賴性。所選細(xì)胞

2、包括：小鼠肺腺癌不同轉(zhuǎn)移率的克隆LA795一LAI(0％)，LA795一LA5(30％)；小鼠前胃癌不同轉(zhuǎn)移率的克隆MFC—B5(O％)、MFCA6(60％)及高分化人鼻咽癌CNE—l細(xì)胞，低分化人鼻咽癌CNE一2Z細(xì)胞。利用細(xì)胞水平研究較敏感的免疫熒光染色法，對上述細(xì)胞系進(jìn)行了Id—l蛋白表達(dá)血清依賴性檢測，結(jié)果顯示：在有血清及無血清條件培養(yǎng)48小時(shí)后各細(xì)胞Id一1蛋白均有表達(dá)，且除了CNE—l其它細(xì)胞系兩種條件下Id一1蛋白表達(dá)差異

3、不明顯。隨后運(yùn)用westernblot及RT—PCR方法進(jìn)一步在蛋白、基因水平檢測CNE一1，CNE一2Z細(xì)胞系Id—l蛋白表達(dá)血清依賴性，結(jié)果顯示無血清48小時(shí)情況下CNE—I細(xì)胞系Id一1蛋白表達(dá)有所降低，與免疫熒光染色法獲得的結(jié)果一致。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明在能長期傳代的惡性和良性腫瘤細(xì)胞系中，Id一1的表達(dá)己全部或部分喪失了對血清的依賴性。為證明Id一1蛋白表達(dá)是否與癌細(xì)胞侵襲力相關(guān)，本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建人、鼠Id—i基因真核質(zhì)粒，試圖轉(zhuǎn)染正常

4、細(xì)胞或惡性度低的腫瘤細(xì)胞，人為改變這些細(xì)胞的Id—I表達(dá)水平，以便觀察強(qiáng)制表達(dá)后其侵襲能力等惡性生物學(xué)特性是否會增強(qiáng)。CNE一1細(xì)胞系是高分化鼻咽癌細(xì)胞系，其體外侵襲能力、體內(nèi)成瘤能力等方面明顯低于低分化鼻咽癌CNE一2Z細(xì)胞系。本實(shí)驗(yàn)首先構(gòu)建了人和鼠Id一1基因真核表達(dá)質(zhì)粒，pCDNA3i—Id—l和pCDNA3OId—l。并擴(kuò)增、分離、純化pCDNA3卜Id一1z質(zhì)粒后用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染了CNE一1細(xì)胞，目前正在篩選Id一1穩(wěn)定高表達(dá)的