癌基因AURKA在腫瘤發(fā)生發(fā)展中作用機制的研究.pdf

1、AURKA基因編碼一個進化上保守的絲氨酸/蘇氨酸激酶,是Aurora激酶家族成員之一。在有絲分裂中,AURKA通過參與中心體的分離和成熟以及紡錘體兩極的建立,確保有絲分裂中染色體的正確分離和胞質(zhì)分裂的順利完成,在細胞周期中起著重要作用。AURKA的異常擴增和/或高表達常見于多種人類腫瘤。近年來的研究表明,AuRKA可參與多條重要的細胞信號通路,作為激酶直接或間接地激活多種致癌蛋白、或使多種抑癌蛋白失活,從而推動腫瘤的發(fā)生發(fā)展。
　

2、　 為了進一步探討AURKA在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用機制,我們對AURKA過表達后在基因表達調(diào)控中處核心位置的細胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子進行了研究。我們利用一種轉(zhuǎn)錄因子活性芯片,在AURKA可誘導(dǎo)表達體系里,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子E2Fl的轉(zhuǎn)錄活性在AURKA誘導(dǎo)表達后升高。對AURKA與E2F1之間的調(diào)控研究發(fā)現(xiàn)在腫瘤組織里AURKA與E2F1表達具有相關(guān)性,AURKA過表達和敲降可引起E2F1蛋白水平相應(yīng)變化。降解實驗表明AURKA過表達可以延緩E2F1

3、依賴于蛋白酶體的泛素化降解,促進E2目的累積。隨后,我們還發(fā)現(xiàn)AURKA的過表達可以誘導(dǎo)microRNA-17-92的表達上調(diào),而這種作用至少部分依賴于E2F1。
　　 為了研究AURKA導(dǎo)致的耐藥性問題,我們建立了AURKA穩(wěn)轉(zhuǎn)食管癌細胞系,發(fā)現(xiàn)AURKA高表達可促進抗凋亡活性；利用一種凋亡芯片篩選得到了具有抗凋亡效應(yīng)的基因PAK7,并且發(fā)現(xiàn)AURKA通過E2F1誘導(dǎo)PAK7的表達,敲降PAK7可部分逆轉(zhuǎn)AURKA的抗凋亡活性

4、。對PAK7的進一步深入研究發(fā)現(xiàn)PAK7在食管癌細胞系和組織標本中高表達,臨床參數(shù)分析顯示PAK7與食管癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤分期存在正相關(guān)關(guān)系,并且PAK7高表達可促進食管癌細胞的遷移能力,轉(zhuǎn)化NIH3T3細胞,使其在免疫缺陷的裸鼠中形成腫瘤,提示PAK7可能是一個潛在的候選癌基因。
　　 為了更全面地了解AURKA過表達后E2目的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié),我們用ChIP-chip的方法檢測了全基因組水平E2F1結(jié)合啟動子的狀況。應(yīng)用兩種不同的

5、分析工具,對E2F1轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的動態(tài)變化進行分析后發(fā)現(xiàn):在AURKA高表達0-24小時期間,E2F1下游靶基因主要富集于EGF等信號通路,而在24-48小時,E2F1下游靶基因主要富集于VEGF、wnt/β-catenin等信號通路,從48小時內(nèi)整體變化來看,啟動子與E2F1結(jié)合的基因主要集中于腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的信號通路以及TGF-β通路等,提示AURKA高表達可能通過E2F1對細胞周期進展具有促進作用。
　　 總之,AURKA是