布加綜合征大鼠模型肝臟中TNF-a和VEGF的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:
　　 1.構(gòu)建可靠、穩(wěn)定的布加綜合征大鼠模型,研究該模型疾病的發(fā)展變化;2.研究布加綜合征大鼠在不同時(shí)問(wèn)段肝臟內(nèi)TNF-α和VEGF的表達(dá)情況及意義。
　　 方法:
　　 1.采用下腔靜脈縮窄法制作布加綜合征大鼠模型:游離大鼠肝后段下腔靜脈周圍組織,用0號(hào)絲線環(huán)繞結(jié)扎下腔靜脈和L形23G鈍頭針,取下鈍頭針,下腔靜脈橫截面積即縮窄約80％;2.選擇健康雌性成年SD大白鼠120只(由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)為

2、實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象,體重均約為400g,隨機(jī)分為A組:正常組即對(duì)照組;B組:假手術(shù)組;C組:手術(shù)組即模型組。每組40只,對(duì)照組不給予手術(shù)處理;假手術(shù)組僅給予手術(shù)開腹分離肝后段下腔靜脈;手術(shù)組采用肝后段下腔靜脈縮窄術(shù)復(fù)制布加綜合征模型,分別于布加綜合征模型建立后1w、4w、8w、12w不同的時(shí)間點(diǎn),各組隨機(jī)處死8只,抽取下腔靜脈血液制備血清,采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定血清TNF-α及VEGF的含量,肝組織行病理檢查,其中的TNF-α、

3、VEGF的表達(dá)水平的變化采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)。
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS10.0,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以-x±s表示。
　　 結(jié)果:
　　 1.下腔靜脈縮窄法制備BCS大鼠模型,死亡率15%,第一周大鼠開始有腹水產(chǎn)生,第四周彩超示:腹腔己開始有明顯液性暗區(qū),肝、脾腫大,下腔靜脈以及主肝靜脈內(nèi)有血栓形成,門靜脈擴(kuò)張,肝實(shí)質(zhì)內(nèi)可見廣泛交通支開放,符合BCS的影像學(xué)表現(xiàn);肝功能及血常規(guī)結(jié)果符合布加綜合征的檢查;2.A、

4、B組大鼠血清TNF-α在各時(shí)間點(diǎn)均比較平穩(wěn),不隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而有明顯變化,A組與B組的變化趨勢(shì)基本一致,比較各時(shí)間的水平,B組大鼠并未因手術(shù)干擾而在各時(shí)間點(diǎn)比A組有明顯差異(P＞0.05)。C組大鼠血清TNF-α在各時(shí)間點(diǎn)呈升高趨勢(shì),各時(shí)間點(diǎn)的總體水平可以看出都大于A組(P＜0.01)與B組(P＜0.01),結(jié)合大鼠肝臟病理變化,TNF-α在血清中的表達(dá)與肝臟纖維化程度正相關(guān)。3.A、B組大鼠血清VEGF在各時(shí)間點(diǎn)均比較平穩(wěn),亦不隨著時(shí)

5、間的延長(zhǎng)而有明顯變化,A組與B組的變化趨勢(shì)基本一致,比較各時(shí)間點(diǎn)VEGF水平,B組大鼠并未因手術(shù)干擾而在各時(shí)間點(diǎn)比A組有明顯差異(P＞0.05)。C組大鼠血清VEGF在各時(shí)間點(diǎn)呈升高趨勢(shì),各時(shí)間點(diǎn)的總體水平可以看出都大于A組(P＜0.01)與B組(P＜0.01),結(jié)合大鼠肝臟病理變化,VEGF在血清中的表達(dá)與肝臟纖維化程度正相關(guān)。4.C組大鼠肝組織內(nèi)TNF-α表達(dá)在第1周開始升高,呈逐漸升高趨勢(shì),各時(shí)間點(diǎn)TNF-α表達(dá)水平都高于A組及B

6、組,統(tǒng)計(jì)有顯著差異(P＜0.01)。A組與B組各時(shí)間點(diǎn)的TNF-α表達(dá)水平則基本無(wú)變化,無(wú)明顯差異(P＞0.05)。5.C組大鼠肝組織內(nèi)VEGF表達(dá)在第1周己明顯升高,呈逐漸升高趨勢(shì),各時(shí)間點(diǎn)VEGF表達(dá)水平都高于A組及B組,統(tǒng)計(jì)有顯著差異(P＜0.01)。A組與B組肝組織內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)的VEGF表達(dá)水平基本無(wú)變化,無(wú)明顯差異(P＞0.05)。6.肝組織病理學(xué)檢查:A組與B組大鼠各時(shí)間點(diǎn)肝組織鏡下均為正常肝組織,而C組大鼠8w、12w肝組織

7、鏡下可見肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂,廣泛肝細(xì)胞脂肪變性、部分壞死,匯管區(qū)擴(kuò)大,纖維組織明顯增生,有較粗纖維間隔形成,并延伸分割肝小葉,隨時(shí)間延長(zhǎng)肝組織纖維化程度越重。
　　 創(chuàng)新性:
　　 1.首次在國(guó)內(nèi)應(yīng)用下腔靜脈縮窄法制備出BCS大鼠模型:
　　 2.首次檢測(cè)TNF-α和VEGF在BCS大鼠肝臟中的表達(dá)情況;
　　 3.首次對(duì)BCS大鼠肝纖維化的進(jìn)程進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察。
　　 結(jié)論:
　　 1.采用下腔