p38MAPK信號通路在周期性張應力介導的牙周膜成纖維細胞增殖中的作用.pdf

1、目的:
　　 牙周病是口腔中兩大主要疾病類型之一,也是人類最古老最普遍的疾病之一,在當今世界范圍內(nèi)患病率依然很高,在我國牙周病的患病率及其危害遠高于齲病。一般認為,因牙周炎拔牙占拔牙總數(shù)的30%～44%。對于牙周病的病因?qū)W研究是個古老而復雜的領域,近一個多世紀以來,世界各國的學者對此進行了大量而深入的研究,牙周炎發(fā)生的根本機制至今仍未完全明確。有研究證實咬合創(chuàng)傷參與了牙周炎的發(fā)生與發(fā)展,并且對牙周組織的改建產(chǎn)生了直接的影響。適當

2、的咬合力可以使牙周膜中主要的感受性和效應性細胞——牙周膜成纖維細胞發(fā)生增殖、分化和凋亡,從而參與牙周組織的改建過程。本次實驗擬在成功構(gòu)建人牙周膜成纖維細胞體外培養(yǎng)—力學刺激模型的基礎上,通過細胞計數(shù)試劑-8和RT-PCR等細胞檢測技術,從分子和基因水平探討周期性張應力對人牙周膜成纖維細胞增殖的影響,初步闡述p38MAPK信號通路在此影響過程中的作用,明確p38MAPK信號通路、周期性張應力和成纖維細胞增殖三者之間的關系,為進一步詮釋咬合

3、創(chuàng)傷在牙周炎發(fā)病過程中的作用提供新的思路,為探尋咬合創(chuàng)傷的干預治療提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 本實驗以體外培養(yǎng)的人牙周膜成纖維細胞為研究對象,構(gòu)建人牙周膜成纖維細胞體外培養(yǎng)—力學刺激模型,利用多通道細胞牽張應力加載系統(tǒng),以靜態(tài)組為對照,實驗組分別加以1h,6h,12h,24h的張應力刺激,頻率為0.1Hz,所加力值以加力板底部硅膠薄膜拉伸的形變率表示,形變率越大,則對細胞施加的張應力越大,本次實驗的細胞形變率為1

4、0%。以細胞計數(shù)試劑-8檢測細胞的增殖情況,采用RT-PCR技術檢測增殖細胞核抗原(PCNA)的表達;同時設計加力+p38MAPK特異性抑制劑組(0h,12h),加力前對細胞加以p38MAPK抑制劑SB203580,再對細胞施以張應力后,再次檢測細胞增殖情況和PCNA的表達。通過SPSS17.0統(tǒng)計軟件對實驗所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。
　　 結(jié)果:
　　 1.體外培養(yǎng)穩(wěn)定的人牙周膜成纖維細胞,成功地構(gòu)建了人牙周膜成纖維細胞體

5、外培養(yǎng)—力學刺激模型。
　　 2.在頻率為0.1Hz,形變率為1096的條件下,同對照組比較,加力1h時細胞增殖減少,6h時細胞增殖開始上升,12h細胞增值達到高峰,24h細胞增殖受到抑制;加入抑制劑SB203580能夠抑制細胞增殖和PCNA的表達。
　　 結(jié)論:
　　 1.成功的構(gòu)建了人牙周膜成纖維細胞體外培養(yǎng)—力學刺激模型。
　　 2.在應力加載條件下,在一定時間內(nèi)可促進成纖維細胞的增殖,加力時間過長