四株雙歧桿菌對高脂飲食大鼠肥胖形成的影響及相關(guān)機(jī)制的研究.pdf

1、第一章四株雙歧桿菌對高脂飲食大鼠肥胖形成的影響 目的：選取從正常人體腸道內(nèi)分離出的四株雙歧桿菌，分析其對高脂飲食大鼠體內(nèi)血脂、血糖、脂肪移動、腸道菌群及其肥胖的影響，旨在發(fā)現(xiàn)同屬不同株的雙歧桿菌在體內(nèi)對動物肥胖作用的差異，從而為篩選到有利于人體不同體重基數(shù)的功能菌株打下基礎(chǔ)，也為特異性功能菌株的研究提供依據(jù)。 方法：48只SD大鼠隨機(jī)均分為6組，D組喂養(yǎng)普通飼料，A、B、C、F、E組喂養(yǎng)高脂飼料，同時給予不同雙歧桿菌干預(yù)

2、，B組(L66-5)、C組(L75-4)、E組(M13-4)、F組(FS3-1-1-2)、A組(模型組)。6w末處死大鼠，通過對大鼠的體重的變化、OGTT、Lee's指數(shù)、內(nèi)臟脂肪重量、肝指數(shù)、肝脂質(zhì)測定、血清TG、TCH和INS的檢測了解雙歧桿菌對高脂飲食大鼠血脂、血糖及脂肪儲存的整體影響，利用肝組織病理HE、SudanⅣ、PAS染色觀察肝臟脂肪及糖原沉積的情況，大、小腸內(nèi)容物中菌群分析情況了解腸道內(nèi)菌群狀態(tài)。 結(jié)果：雙歧桿菌

3、干預(yù)的B、F兩組體重有較明顯的下降，SD大鼠的體重增加量由模型組的212.55g±18.54g分別下降至175.19g±41.24g(B組)、197.34±35.61(F組)，B、F兩組的Lee's指數(shù)及C、E、F肝指數(shù)較模型組也有明顯降低。血脂的測定顯示各雙歧桿菌干預(yù)組均有降低TG的作用，與A組比較有統(tǒng)計學(xué)差異，同時B、F兩組的TCH也明顯下降，但對OGTT及INS的調(diào)整作用較小。病理學(xué)觀察提示各雙歧桿菌干預(yù)組均可不同程度的減輕肝組織

4、脂質(zhì)蓄積、脂肪變性、糖原沉積，并可使脂肪細(xì)胞增多、體積變小，以雙歧桿菌L66-5及FS3-1-1-2組作用更明顯。腸道菌群分析發(fā)現(xiàn)E組中小腸內(nèi)容物中的乳酸桿菌明顯減少，由A組中的7.48±3.04(lg％)下降到1.23±3.25(lg％)，而擬桿菌增多至9.02±4.02(lg％)，相比正常組的6.88±1.03(lg％)具有統(tǒng)計學(xué)差異。 結(jié)論： (1)應(yīng)用脂肪含量為25.17％，蛋白質(zhì)含量為16.52％的復(fù)合高脂飼料

5、配方連續(xù)喂養(yǎng)SD大鼠6w可成功造成營養(yǎng)性肥胖模型。 (2)雙歧桿菌株L66-5、FS3-1-1-2可較好的阻滯高脂飲食大鼠體重增加，同時具有降低血清TG、TCH，改善肝臟和內(nèi)臟脂質(zhì)沉積、增加脂肪細(xì)胞數(shù)量及減少脂肪細(xì)胞體積的作用，并可能影響肝糖原的儲存，但對血糖及INS的調(diào)節(jié)作用不明顯。 (3)雙歧桿菌株M13-4可加速高脂飲食大鼠體重增加，但對血清TG、TCH及肝臟的脂質(zhì)沉積具有改善作用，而對肝糖原的儲存、血糖及INS的

6、調(diào)節(jié)作用不明顯。 (4)雙歧桿菌株L75-4對高脂飲食大鼠體重影響不明顯，但對大鼠血清TG、TCH及肝臟的脂質(zhì)沉積具有改善作用，對血糖及INS的分泌無影響。 第二章四株雙歧桿菌干預(yù)高脂飲食大鼠肥胖機(jī)制的初步探討 目的：探討四株雙歧桿菌菌株進(jìn)入機(jī)體后引發(fā)的一系列脂肪細(xì)胞內(nèi)分泌功能的改變對肥胖形成及血脂的影響機(jī)制。對四種同屬不同株雙歧桿菌干預(yù)高脂飲食SD肥胖大鼠模型后，大鼠肝、腸、骨骼肌、脂肪組織內(nèi)PPAR-α、PP

7、AR-γ1、PPAR-γ2、TNF-α、ADIPOQ在基因蛋白水平的表達(dá)變化上作出研究。 方法：第一章試驗處死大鼠時，取各組SD大鼠的肝左葉、回盲部的小腸側(cè)腸粘膜、后腿處骨骼肌、腎周及睪丸周圍脂肪組織，提取各組織的總RNA及肝組織的總蛋白。應(yīng)用RT-PCR方法檢測SD大鼠肝、小腸、骨骼肌、脂肪組織中PPAR-α、PPAR-γ1、PPAR-γ2mRNA及脂肪組織中TNF-α、ADIPOQmRNA的表達(dá)水平，免疫印跡法檢測肝組織中P

8、PAR-γ的蛋白表達(dá)變化。 結(jié)果： 1、各雙歧桿菌干預(yù)組的肝組織PPAR-αmRNA表達(dá)水平較模型組具有明顯上升的趨勢，腸組織中的PPAR-αmRNA僅在B、E兩組中升高明顯。 2、肝、腸組織中的PPAR-γ1mRNA在雙歧桿菌C、E、F組表達(dá)較模型組明顯升高，而在雙歧桿菌B組中升高不具有統(tǒng)計學(xué)意義。 3、PPAR-γ2mRNA在脂肪組織中特異性表達(dá)，且各雙歧桿菌干預(yù)組的脂肪組織中PPAR-γ2mRNA表

9、達(dá)量均高于模型組，尤以D、E兩組明顯，差異具有高度顯著性意義。E組的肝組織中也出現(xiàn)了較微量的PPAR-γ2mRNA表達(dá)。 4、骨骼肌及脂肪組織中的PPAR-α、PPAR-γ1mRNA的表達(dá)在各組之間無明顯改變。 5、雙歧桿菌B、C、F組脂肪組織中的TNF-αmRNA表達(dá)量較模型組下降明顯，E組的TNF-αmRNA表達(dá)量下降較少。 6、各組SD大鼠脂肪組織中ADIPOQmRNA表達(dá)量無明顯變化。 7、雙歧桿

10、菌C、E、F組的肝組織PPAR-γ蛋白表達(dá)水平較模型組具有明顯上升的趨勢，但雙歧桿菌B組中蛋白表達(dá)水平升高不具有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論： (1)雙歧桿菌L66-5株具有激活肝組織PPAR-α及脂肪組織PPAR-γ2并減少脂源性的TNF-α生成作用。 (2)雙歧桿菌FS3-1-1-2株及雙歧桿菌L75-4株可增加機(jī)體內(nèi)肝組織中PPAR-α、PPAR-γ1及脂肪組織PPAR-γ2的表達(dá)并減少脂肪組織YNF-α的分泌。