自體骨髓單個(gè)核細(xì)胞移植對(duì)血漿利鈉肽水平的影響.pdf

1、全文分為二部分: 第一部分實(shí)驗(yàn)研究 國內(nèi)外研究表明骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bonemarrowmesenchymalstemcells,BM-MSC)經(jīng)5-氮胞苷(5-aza)誘導(dǎo)后可分化為心肌樣細(xì)胞，具有心肌特有的肌節(jié)結(jié)構(gòu)和心肌收縮運(yùn)動(dòng)、動(dòng)作電位等特點(diǎn)。為了進(jìn)一部明確細(xì)胞移植后早期BMMC是否通過其內(nèi)分泌作用來改善心臟功能，我們參照國外通用的BMMC分離、培養(yǎng)、純化及誘導(dǎo)方法，通過觀察傳代純化后BMMC經(jīng)5-aza誘導(dǎo)前后細(xì)

2、胞形態(tài)的變化，檢測(cè)細(xì)胞上清液ANP、BNP來評(píng)價(jià)BMMC在誘導(dǎo)后作用及分泌功能。 目的： 1、通過對(duì)人骨髓干細(xì)胞體外分離、培養(yǎng)、純化及誘導(dǎo)來模擬干細(xì)胞移植入心肌后的過程，觀察細(xì)胞誘導(dǎo)前后培養(yǎng)液ANP、BNP變化，進(jìn)一步觀察BMMC在誘導(dǎo)后1周后是否有分泌功能，幫助我們對(duì)于臨床上觀察到的現(xiàn)象進(jìn)一步解釋。 2、目前國內(nèi)外對(duì)于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、純化及誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)研究局限于動(dòng)物，本實(shí)驗(yàn)經(jīng)病人簽屬知情同意書，利用病

3、人在治療過程中多余的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)、純化及誘導(dǎo)，在一定程度上更有說服力、更貼近于臨床，期望對(duì)臨床研究提供有力的理論依據(jù)。 方法： 1、取骨髓單個(gè)核細(xì)胞移植患者在治療過程中骨髓10毫升。 2、骨髓肝素抗凝后在細(xì)胞分離間無菌條件下分離骨髓單個(gè)核細(xì)胞，計(jì)數(shù)。根據(jù)國外文獻(xiàn)報(bào)道及國內(nèi)改良方法培養(yǎng)、傳代、純化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，然后取細(xì)胞上清液檢測(cè)ANP、BNP，ELISA方法測(cè)定BNP，放免法測(cè)定ANP。 3、經(jīng)過2個(gè)

4、月培養(yǎng)傳代純化的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分兩組，實(shí)驗(yàn)組經(jīng)5-aza誘導(dǎo)，3天及7天后檢測(cè)ANP、BNP；對(duì)照組繼續(xù)用原細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)，3天及7天后檢測(cè)ANP、BNP。 4、光鏡下觀察兩組細(xì)胞在形態(tài)上的變化。 結(jié)果： 1、髓間充質(zhì)干細(xì)胞在培養(yǎng)過程中形態(tài)發(fā)生變化，經(jīng)5-aza誘導(dǎo)后形態(tài)變化更明顯，細(xì)胞形態(tài)明顯變長、變粗、多數(shù)呈梭形，少數(shù)不規(guī)則，排列無序。 2、誘導(dǎo)前及誘導(dǎo)3,7后細(xì)胞上清液中BNP均陰性。 3

5、、誘導(dǎo)前及誘導(dǎo)后3天細(xì)胞上清液中ANP為陰性，而誘導(dǎo)后7天細(xì)胞上清液中檢測(cè)到ANP。 結(jié)論： 1、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在-aza誘導(dǎo)前后形態(tài)顯著不同，可能已向類心肌細(xì)胞分化。 2、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在5-aza誘導(dǎo)前及誘導(dǎo)后3天均無ANP、BNP分泌，而在誘導(dǎo)后7天，可見ANP分泌、而無BNP分泌，說明誘導(dǎo)后BMMC向類心房肌細(xì)胞分化。 第二部分臨床研究 心肌梗死后，慢性缺血心肌與不同程度的疤痕組織共同

6、作用引起心肌重塑導(dǎo)致缺血性心肌病，而自身的體液及細(xì)胞因子又不足以對(duì)抗此作用，因此，缺血性心肌病成了心梗后患者死亡的主要原因。近來的實(shí)驗(yàn)證明多能的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可以分化成心肌細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞。國外及海軍總醫(yī)院心內(nèi)科的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均證實(shí)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞通過分化成為血管內(nèi)皮細(xì)胞及心肌樣細(xì)胞來改善缺血性心臟病的心肌收縮舒張功能及灌注情況，進(jìn)而改善心臟功能。另外，StrauerBE及TseHF等均已經(jīng)冠脈移植MBMC可以改善缺血性心肌病人的心肌灌

7、注及節(jié)段運(yùn)動(dòng)。我們的臨床觀察發(fā)現(xiàn)，缺血性心肌病患者在MBMC經(jīng)冠脈移植后早期(1周內(nèi))患者即出現(xiàn)排尿多、呼吸困難癥狀明顯減輕等臨床表現(xiàn)。根據(jù)以往的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果，通過梗死區(qū)血管數(shù)目的增多與心梗面積減小來改善心功能通常發(fā)生在移植后2至4周，這一表現(xiàn)顯然與上述結(jié)果不符，考慮很可能有血管活性物質(zhì)參與這一過程，根據(jù)患者的臨床表現(xiàn)最有可能的血管活性物質(zhì)為利鈉肽，因此，本研究主要通過觀察缺血性心肌病心力衰竭細(xì)胞移植后血漿利鈉肽的變化，探討MBMC移植

8、在改善缺血性心力衰竭的早期作用。 目的： 1、觀察MBMC治療缺血性心肌病患者早期心功能改善情況及血漿利鈉肽水平，探討心功能改善的機(jī)制。 2、為臨床骨髓干細(xì)胞移植治療缺血性心肌病患者早期改善提供依據(jù)。 方法： 1、嚴(yán)重缺血性心肌病36人，分為兩組。24人為治療組(細(xì)胞移植+標(biāo)準(zhǔn)藥物治療)，12人為對(duì)照組(單純標(biāo)準(zhǔn)藥物治療)。 2、入選病例條件：(1)慢性缺血性心臟疾病并有心肌梗死病史。(2

9、)、左室射血分?jǐn)?shù)＜40％。排除標(biāo)準(zhǔn)：心瓣膜病變、肥厚型及擴(kuò)張型心肌病、慢性阻塞性肺病及嚴(yán)重肝腎功能不全等。 3、兩組人術(shù)前治療藥物基本恒定，均接受正規(guī)藥物治療包括利尿劑，β-受體阻斷劑,ACEI，洋地黃類藥物、硝酸酯類藥物等。 4、兩組病人術(shù)前及術(shù)后3天、7天，ELISA方法測(cè)定血漿BNP，放免法測(cè)定血漿ANP。 5、兩組病人術(shù)前和術(shù)后7天超聲檢測(cè)左室功能：左室舒張末容量(LVEDV)、收縮末容量(LVESV)、

10、射血分?jǐn)?shù)(LVEF)，并通過6分鐘步行試驗(yàn)來評(píng)價(jià)心衰改善程度。 6、數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果均經(jīng)計(jì)算機(jī)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，采用t檢驗(yàn)做統(tǒng)計(jì)分析，所有數(shù)值報(bào)告記錄形式：均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 結(jié)果： 1、實(shí)驗(yàn)前兩組血漿ANP、BNP及心功能狀況均無明顯差異。 2、治療3天后移植組及對(duì)照組BNP,ANP均無明顯變化，治療7天后，移植組BNP下降了66％，對(duì)照組下降了23.5％，移植組ANP上升37.8％，而對(duì)照組下降14％。

11、 3、心臟超聲心動(dòng)圖結(jié)果示：移植組LVEF由33.29±1.24％升至43.78±2.14％(P＜0.01)，對(duì)照組LVEF值由37.20±3.80％升至38.97±2.76％(P＞0.01)。 4、6分鐘步行試驗(yàn)結(jié)果示移植組6分鐘步行距離(米)由148.15±16.86提高到217.04±19.54(P＜0.01)，對(duì)照組由133.33±22.51提高到147.5±22.35(P＞0.05) 結(jié)論： 1、兩