犬骨髓單個(gè)核細(xì)胞自體移植治療心肌梗死的應(yīng)用基礎(chǔ)研究.pdf

1、目的：1．建立犬心肌梗死模型，比較心肌聲學(xué)造影和強(qiáng)化核磁共振掃描對(duì)心肌梗死的評(píng)價(jià)。2．研究心梗模型犬自體骨髓單個(gè)核細(xì)胞(BM-MNCs)移植對(duì)心功能及心肌灌注的影響。3．探討利用核磁共振掃描技術(shù)活體示蹤移植的BM-MNCs。 方法：1．采用全麻開(kāi)胸結(jié)扎冠狀動(dòng)脈的方法對(duì)20只成年家犬建立心肌梗死模型，2周后以心肌聲學(xué)造影和強(qiáng)化核磁共振掃描對(duì)心梗面積及存活心肌進(jìn)行評(píng)價(jià)，處死動(dòng)物時(shí)測(cè)量瘢痕面積(與超聲及核磁檢查在同一短軸切面)并比較三

2、者的差異。2．心梗模型犬14只，隨機(jī)分為3組。于心梗后2周再次開(kāi)胸，經(jīng)心外膜分別注射107濃度BM-MNCs(實(shí)驗(yàn)組1)、105濃度BM-MNCs(實(shí)驗(yàn)組2)和等體積的磷酸緩沖液(對(duì)照組)。4周后復(fù)查超聲心動(dòng)圖和心肌聲學(xué)造影并比較治療前后的差別。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物心臟標(biāo)本行病理學(xué)檢查計(jì)算心梗區(qū)毛細(xì)血管密度。3．超順磁性氧化鐵-Feridex是一種可用于臨床的新型核磁共振對(duì)比劑，產(chǎn)生T2低信號(hào)。Feridex體外標(biāo)記自體BM-MNCs，然后經(jīng)心外膜

3、注射到4只模型犬心梗區(qū)。分別于注射后1周、2周、4周進(jìn)行1.5T核磁共振系列掃描，活體追蹤觀察移植細(xì)胞的信號(hào)變化。掃描條件采用心電門(mén)控、呼吸導(dǎo)航技術(shù)和優(yōu)化的3DSSFP序列在犬自主呼吸下進(jìn)行。處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)本行普魯士藍(lán)染色從微觀的角度觀察Feridex標(biāo)記細(xì)胞的去向。 結(jié)果：1．開(kāi)胸結(jié)扎犬冠脈制作心肌梗死模型的成功率90％，死亡率10％。心肌聲學(xué)造影和增強(qiáng)-核磁共振掃描測(cè)量的心肌梗死面積分別2.29±0.50cm2、1.73±0

4、.72 cm2，大體標(biāo)本測(cè)量瘢痕面積為1.70±0.85 cm2，心肌聲學(xué)造影所測(cè)面積大于后兩者測(cè)得面積，有顯著性差別(p＜0.05)。MCE和增強(qiáng)MRI均可發(fā)現(xiàn)心梗區(qū)周?chē)拇婊钚募　?．自體BM-MNCs移植后4周超聲心動(dòng)圖顯示可顯著增加左室射血分?jǐn)?shù)(62％和58％vs48％)；減小心肌梗死面積(2.74cm2 vs1.91 cm2；2.49cm2 vs2.03 cm2)；改善E/A比值(0.78和0.89 vs0.42)(p＜0.0

5、5)；但對(duì)心梗區(qū)室壁厚度沒(méi)有影響(0.53cm vs0.59cm vs0.60cm)(p＞0.05)。心肌聲學(xué)造影圖像分析軟件測(cè)得細(xì)胞移植后強(qiáng)度-時(shí)間曲線的A值、k值及A×k值較移植前明顯增加(p＜0.05)，對(duì)照組沒(méi)有顯著性差異(p＞0.05)。3．普魯士藍(lán)染色顯示體外Feridex標(biāo)記BM-MNCs成功率達(dá)98％以上，而且細(xì)胞活性不受影響；其中3只實(shí)驗(yàn)犬標(biāo)記細(xì)胞移植區(qū)1周內(nèi)可用1.5T磁共振儀3DSSFP序列在體掃描到T2低信號(hào)影像

6、，4周時(shí)該低信號(hào)消失；同樣條件下經(jīng)甲醛固定的標(biāo)記細(xì)胞在1周時(shí)也可檢測(cè)到T2低信號(hào)，但2周時(shí)該低信號(hào)消失；未標(biāo)記細(xì)胞移植區(qū)沒(méi)有檢測(cè)到低信號(hào)。增強(qiáng)-MRI可明確注入的細(xì)胞在心肌梗死區(qū)內(nèi)。4．BM-MNCs移植犬心梗區(qū)鏡下可見(jiàn)大量簇狀排列的新生毛細(xì)血管，實(shí)驗(yàn)組1、實(shí)驗(yàn)組2和對(duì)照組的毛細(xì)血管密度分別是79.8±4.8個(gè)/mm2，74.8±6.5個(gè)/mm2，28.6±5.2個(gè)/mm2(p＜0.05)。普魯士藍(lán)染色鏡下可觀察到Feriidex標(biāo)記的

7、BM-MNCs向心肌樣細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的分化，F(xiàn)eridex可被巨噬細(xì)胞吞噬。 結(jié)論：1．開(kāi)胸結(jié)扎冠狀動(dòng)脈是可靠的制作犬心肌梗死模型的方法，心肌聲學(xué)造影和強(qiáng)化核磁共振掃描是檢測(cè)心梗及存活心肌的準(zhǔn)確可靠手段。2．心梗模型犬自體骨髓單個(gè)核細(xì)胞移植能夠改善心功能和心梗區(qū)血流灌注。3．經(jīng)Feridex標(biāo)記的骨髓單個(gè)核細(xì)胞在體能夠被1.5T磁共振儀檢測(cè)到T2低信號(hào)影像，在病理能夠被追蹤發(fā)現(xiàn)向心肌樣細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的分化。4．心肌聲學(xué)造