順鉑誘導(dǎo)導(dǎo)入外源性FHIT基因的宮頸癌SiHa細(xì)胞系細(xì)胞凋亡作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目錄縮略語(yǔ)簡(jiǎn)表……………………………………………1中文摘要………………………………………………2英文摘要………………………………………………4正文……………………………………………………6引言…………………………………………………6實(shí)驗(yàn)材料……………………………………………8實(shí)驗(yàn)方法及步驟……………………………………10實(shí)驗(yàn)結(jié)果……………………………………………16討論…………………………………………………26結(jié)論……………………………

2、……………………30參考文獻(xiàn)………………………………………………31附錄（測(cè)序圖）………………………………………33文獻(xiàn)綜述………………………………………………34發(fā)表文章………………………………………………42致謝……………………………………………………432順鉑誘導(dǎo)導(dǎo)入外源性順鉑誘導(dǎo)導(dǎo)入外源性FHITFHIT基因的宮頸癌基因的宮頸癌SiHaSiHa細(xì)胞系細(xì)胞凋亡作用的實(shí)驗(yàn)研究細(xì)胞系細(xì)胞凋亡作用的實(shí)驗(yàn)研究碩士研究生:李燕雄導(dǎo)師:陳忠東

3、教授摘要目的目的驗(yàn)證外源性脆性組氨酸三聯(lián)體（FHIT）抑癌基因的導(dǎo)入是否誘導(dǎo)宮頸癌SiHa細(xì)胞凋亡，觀察FHIT導(dǎo)入與順鉑（DDP）聯(lián)合應(yīng)用誘導(dǎo)宮頸癌SiHa細(xì)胞凋亡的作用是否有協(xié)同效應(yīng)，為聯(lián)合基因治療和化療藥物治療人宮頸癌提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法方法將重組質(zhì)粒PRcCMVFHIT(SiHaFHIT組)及空質(zhì)粒PRcCMV（SiHaneo組）分別用脂質(zhì)體和電穿孔方法轉(zhuǎn)染無(wú)內(nèi)源性FHIT蛋白表達(dá)的SiHa細(xì)胞（未轉(zhuǎn)染SiHa細(xì)胞為SiHaC組）

4、，用PEGFPC2質(zhì)粒檢測(cè)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染效率，蛋白質(zhì)印跡(Westernblot)法檢測(cè)外源性FHIT蛋白表達(dá)情況，流式細(xì)胞術(shù)（FCM）分析轉(zhuǎn)染細(xì)胞的凋亡及細(xì)胞周期。分別用0.5μgml、1.0μgml、2.0μgml濃度的DDP處理SiHaFHIT組、SiHaneo組、SiHaC組細(xì)胞，通過(guò)噻唑藍(lán)（MTT）比色法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率，吖啶橙溴化乙啶（AOEB）染色熒光顯微鏡觀察凋亡細(xì)胞形態(tài)，F(xiàn)CM測(cè)定細(xì)胞凋亡率，比較DDP處理后各組細(xì)胞生長(zhǎng)和

5、凋亡程度的區(qū)別。結(jié)果結(jié)果熒光顯微鏡下觀察可見PEGFPC2脂質(zhì)體和電穿孔方法轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染效率無(wú)明顯區(qū)別（P﹥0.05）但兩種方法在轉(zhuǎn)染過(guò)程中對(duì)細(xì)胞形態(tài)的影響有差異。FCM檢測(cè)SiHaFHIT組、SiHaneo組、SiHaC組細(xì)胞的凋亡率分別為22.07%：4.86%：3.75%SiHaFHIT組細(xì)胞凋亡率顯著升高（SiHaFHIT組與SiHaneo組、SiHaC組相比P﹤0.05）；細(xì)胞周期分析顯示：SiHaFHIT組G0G1