順鉑誘導導入外源性FHIT基因的宮頸癌SiHa細胞系細胞凋亡作用的實驗研究.pdf

1、目錄縮略語簡表……………………………………………1中文摘要………………………………………………2英文摘要………………………………………………4正文……………………………………………………6引言…………………………………………………6實驗材料……………………………………………8實驗方法及步驟……………………………………10實驗結果……………………………………………16討論…………………………………………………26結論……………………………

2、……………………30參考文獻………………………………………………31附錄（測序圖）………………………………………33文獻綜述………………………………………………34發(fā)表文章………………………………………………42致謝……………………………………………………432順鉑誘導導入外源性順鉑誘導導入外源性FHITFHIT基因的宮頸癌基因的宮頸癌SiHaSiHa細胞系細胞凋亡作用的實驗研究細胞系細胞凋亡作用的實驗研究碩士研究生:李燕雄導師:陳忠東

3、教授摘要目的目的驗證外源性脆性組氨酸三聯(lián)體（FHIT）抑癌基因的導入是否誘導宮頸癌SiHa細胞凋亡，觀察FHIT導入與順鉑（DDP）聯(lián)合應用誘導宮頸癌SiHa細胞凋亡的作用是否有協(xié)同效應，為聯(lián)合基因治療和化療藥物治療人宮頸癌提供實驗依據(jù)。方法方法將重組質(zhì)粒PRcCMVFHIT(SiHaFHIT組)及空質(zhì)粒PRcCMV（SiHaneo組）分別用脂質(zhì)體和電穿孔方法轉染無內(nèi)源性FHIT蛋白表達的SiHa細胞（未轉染SiHa細胞為SiHaC組）

4、，用PEGFPC2質(zhì)粒檢測瞬時轉染效率，蛋白質(zhì)印跡(Westernblot)法檢測外源性FHIT蛋白表達情況，流式細胞術（FCM）分析轉染細胞的凋亡及細胞周期。分別用0.5μgml、1.0μgml、2.0μgml濃度的DDP處理SiHaFHIT組、SiHaneo組、SiHaC組細胞，通過噻唑藍（MTT）比色法檢測細胞增殖抑制率，吖啶橙溴化乙啶（AOEB）染色熒光顯微鏡觀察凋亡細胞形態(tài)，F(xiàn)CM測定細胞凋亡率，比較DDP處理后各組細胞生長和

5、凋亡程度的區(qū)別。結果結果熒光顯微鏡下觀察可見PEGFPC2脂質(zhì)體和電穿孔方法轉染組的細胞的瞬時轉染效率無明顯區(qū)別（P﹥0.05）但兩種方法在轉染過程中對細胞形態(tài)的影響有差異。FCM檢測SiHaFHIT組、SiHaneo組、SiHaC組細胞的凋亡率分別為22.07%：4.86%：3.75%SiHaFHIT組細胞凋亡率顯著升高（SiHaFHIT組與SiHaneo組、SiHaC組相比P﹤0.05）；細胞周期分析顯示：SiHaFHIT組G0G1