萊姆病螺旋體人B細胞抗原表位多態(tài)性和OspC免疫學(xué)特性.pdf

1、萊姆病(Lyme disease，LD)，也稱萊姆疏螺旋體病(Lyme Borreliosis)，是一種蜱傳感染性人獸共患病。萊姆病螺旋體可引起人體多系統(tǒng)、器官的損害，典型癥狀為游走性紅斑(erythema migrans，EM)，后期可侵犯關(guān)節(jié)、心臟和神經(jīng)系統(tǒng)，嚴重者終生致殘甚至死亡。萊姆病早期經(jīng)抗生素治療后容易治愈，但若未及時治療而侵犯多系統(tǒng)會致殘甚至死亡。因此，提高早期診斷能力及開發(fā)有效的疫苗成為萊姆病防治的關(guān)鍵和研究熱點。

2、>　　本研究中，我們對59株萊姆病螺旋體的5種重要蛋白抗原(41KD鞭毛蛋白、BmpA、P83/100、P66和OppA2)的編碼基因序列及其人B細胞抗原表位序列的多態(tài)性進行研究。同時，我們將對中國阿弗西尼疏螺旋體基因型代表菌株FP1的ospC基因克隆表達，并對其免疫保護性進行初步研究。為研制萊姆病的早期診斷試劑和多價亞單位疫苗提供基礎(chǔ)。
　　本研究經(jīng)過對相關(guān)基因的PCR擴增、測序和數(shù)據(jù)比對分析，我們獲得了41KD鞭毛蛋白、Bmp

3、A、P83/100、P66和OppA25種蛋白抗原編碼基因的序列多態(tài)性數(shù)據(jù)。首先，根據(jù)每個蛋白氨基酸序列的聚類結(jié)果中，狹義伯氏疏螺旋體(B.b.s.s)、伽氏疏螺旋體(B.garinii)和阿弗西尼疏螺旋體(B.afzelii)三個基因型菌株分別聚類為3個簇(cluster)，與之前的分型結(jié)果基本一致;其中，阿弗西尼疏螺旋體基因型菌株在基因型內(nèi)較保守，伽氏疏螺旋體基因型菌株的變異具有明顯的亞簇聚類，分別為亞簇2(subcluster2)

4、和亞簇3(subcluster3)。在bmpA基因的聚類結(jié)果中，JC1-7菌株的聚類群發(fā)生改變，由伽氏疏螺旋體基因型改變?yōu)榘⒏ノ髂崾杪菪w基因型，這種現(xiàn)象提示在bmpA基因中可能存在基因水平轉(zhuǎn)移事件的發(fā)生。另外，阿弗西尼疏螺旋體基因型菌株的p83/100基因在429-458aa位置存在30個氨基酸的缺失，其中含有一個人B細胞抗原表位;伽氏疏螺旋體基因型的15株新疆分離株的P66基因在508aa位置由CAA突變?yōu)門AA，導(dǎo)致這15株菌株中

5、P66復(fù)制表達提前終止。阿弗西尼疏螺旋體基因型4株分離株的P66基因在1523bp處插入一個堿基A和一個堿基C，導(dǎo)致其氨基酸序列在511aa終止。
　　本研究成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-30a-OspC并在宿主菌內(nèi)高效表達;Westernblot結(jié)果表明rOspC與萊姆病螺旋體FP1的多克隆抗體有明顯的抗原抗體反應(yīng); rOspC免疫兔血清的IgG效價顯著升高(1∶3200或1∶6400);體外中和試驗表明實驗組的免疫兔血清均能中和10

6、6個/ml的萊姆病螺旋體。
　　我們研究了中國萊姆病螺旋體5種主要蛋白抗原編碼基因及其人B細胞抗原表位多態(tài)性，結(jié)果表明存在較明顯的基因型間多態(tài)性。本研究中，41KD鞭毛蛋白在基因型內(nèi)較保守，其余4種蛋白均存在變異，特別是伽氏疏螺旋體基因型內(nèi)多態(tài)性更加顯著。為提高診斷靈敏度和高效疫苗保護力，在研發(fā)過程中我們要考慮各基因型間以及伽氏疏螺旋體基因型內(nèi)的變異性。阿弗西尼疏螺旋體基因型菌株中p83/100基因的30個氨基酸缺失可作為分型的一