桿狀病毒誘導SL-1細胞凋亡過程中線粒體結構變化和凋亡相關蛋白的定位.pdf

1、細胞凋亡是目前的研究熱點，二十世紀九十年代以來，與細胞凋亡相關的因子以及細胞凋亡的信號通路已逐漸清晰，特別是作為模式生物的線蟲、果蠅與哺乳動物細胞等，然而桿狀病毒誘導昆蟲細胞凋亡的機制還十分模糊。我們以前的研究表明芹菜夜蛾核型多角體病毒(Anagrapha(Syngrapha)falifera multiple nuclearpolyhedrosis virus，AfMNPV)能誘導鱗翅目斜紋夜蛾(Spodoptera litura)S

2、L-1細胞凋亡，并發(fā)現(xiàn)凋亡過程中線粒體膜電位降低，用Western檢測到了線粒體蛋白細胞色素C從線粒體釋放至細胞質(zhì)基質(zhì)中，其凋亡路徑可能類似于與哺乳動物細胞凋亡的線粒體通路。為了進一步闡明AfMNPV誘導SL-1細胞凋亡的凋亡機制，本文擬探討AfMNPV誘導SL-1細胞凋亡過程中線粒體結構變化以及凋亡相關蛋白的定位：
　　 1.AfMNPV誘導SL-1細胞凋亡過程中線粒體的超微結構變化
　　 對AfMNPV誘導凋亡的SL

3、-1細胞線粒體進行超微結構觀察發(fā)現(xiàn)：AfMNPV接種4小時可見SL-1細胞線粒體數(shù)量明顯增多，線粒體嵴發(fā)生破裂；8小時后線粒體腫脹、變圓，線粒體嵴減少且空泡化，其他細胞器、細胞核、細胞質(zhì)也發(fā)生明顯的變化；16小時后線粒體固縮，電子密度增大，體積減小數(shù)倍。
　　 2.凋亡相關蛋白的定位
　　 細胞色素C與Bax蛋白是哺乳動物細胞凋亡線粒體途徑中的凋亡相關蛋白質(zhì)，正常細胞中Bax蛋白定位于細胞質(zhì)基質(zhì)，細胞色素C定位于線粒體膜

4、。受到凋亡信號的刺激后，細胞色素C與Bax蛋白分別發(fā)生定位變化：Bax蛋白從細胞質(zhì)基質(zhì)轉位插入線粒體膜，引起線粒體膜通透性的改變，從而導致細胞色素C從線粒體釋放至細胞質(zhì)基質(zhì)中。
　　 2.1細胞色素C的定位
　　 AfMNPV處理SL-1細胞，于28℃培養(yǎng)箱分別培養(yǎng)4h、8h后用MitoTracker RedCMXRos標記線粒體，隨后對細胞色素C進行標記，共聚焦顯微鏡照相，觀察細胞色素C的定位情況。研究表明對照(正常S

5、L-1細胞)中線粒體與細胞色素C共定位，病毒感染4h后，細胞色素C呈彌散狀態(tài)，與線粒體不能共定位，說明從線粒體釋放。
　　 2.1 Bax樣蛋白的定位
　　 AfMNPV處理SL-1細胞，于28℃培養(yǎng)箱分別培養(yǎng)3h、6h后用線粒體染料標記線粒體，隨后對Bax蛋白進行標記，共聚焦顯微鏡照相，觀察Bax樣蛋白的定位。研究表明，在正常細胞中，Bax樣蛋白彌散分布在細胞質(zhì)基質(zhì)中，而AfMNPV處理SL-1細胞3h后Bax則與線粒