30601.pi3kakt信號通路與桿狀病毒感染和昆蟲細胞凋亡的關(guān)系

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文PI3KAkt信號通路與桿狀病毒感染和昆蟲細胞凋亡的關(guān)系姓名：肖煒申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：龐義20090606中山大學(xué)博士學(xué)位論文肖煒細胞，6hpi時Westernblot檢測磷酸化Akt水平，結(jié)果表明Akt磷酸化水平隨著LY294002濃度的升高而降低，10和20rtMLY294002處理使AcMNPV感染的Sf9細胞中的磷酸化Akt降至本底水平。這些結(jié)果首次證實AcMNPV可以通過P13K途徑激

2、活Sf9細胞Al(t。接下來我們考察了P13KAkt信號通路對AcMNPV在Sf9細胞中增殖的影響。病毒感染后不同時間點測定芽生型病毒(buddedvirus，BV)和包涵體(occlusionbodyOB)數(shù)量發(fā)現(xiàn)，在各時間點LY294002都顯著降低了BV和OB的產(chǎn)生。說明AcMNPV的有效增殖需要P13KAkt信號通路的協(xié)助。在2hpi加入LY294002處理細胞對子代病毒產(chǎn)量的影響與感染前l(fā)h加入LY294002的相似，說明LY

3、294002并不影響病毒進入細胞。在8，12和24hpi加入LY294002對子代病毒產(chǎn)量的影響逐漸降低。這些結(jié)果表明，病毒進入細胞后的早期復(fù)制過程對P13KAkt信號通路的依賴性較強，隨后逐漸減弱。另外，Slotblot和Westernblot檢測發(fā)現(xiàn)當(dāng)P13KAkt信號通路受到抑制后，病毒DNA合成，晚期(38K和VP39)和極晚期(多角體蛋白)基因的表達均受到抑制，但病毒極早期(正1)和早晚期(GP64)基因的表達不受影響。上述這

4、些結(jié)果首次證明P13KAkt信號通路對AcMNPV在Sf9細胞中復(fù)制具有重要作用。由于P13KAkt信號通路在調(diào)控細胞存活和凋亡過程中具有重要作用，所以本研究的另一部分考察了P13KAkt信號通路與鱗翅目昆蟲細胞凋亡的關(guān)系。結(jié)果表明LY294002可以抑制vAcP354∞H。GFP(缺失抗凋亡基因筇5的重組AcMNPV)誘導(dǎo)的Sf9細胞凋亡，Slotblot分析顯示這種抑制作用是由于LY294002抑制了vAcP351@PH乇FP的DN

5、A合成。此外，LY294002也可以抑制50ng／mlActD誘導(dǎo)的Sf9和Hi5細胞凋亡。由于LY294002可以特異性地抑制P13K的活性，所以本研究結(jié)果暗示P13KAkt信號通路參與了ActD誘導(dǎo)的Sf9和Hi5細胞凋亡。我們還研究了瞬時表達AcMNPVIEl和ActD處理對Sf9和Hi5細胞的影響。瞬時表達IEl或加入10ng／mlActD可以誘導(dǎo)Sf9細胞凋亡，而同時瞬時表達IEl并用10ng／mlActD處理的Sf9細胞存活