藥根堿靶向腫瘤蛋白TNIK抑制乳腺癌生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移機(jī)制研究.pdf

1、乳腺癌是目前嚴(yán)重危害女性健康的惡性腫瘤之一，術(shù)后轉(zhuǎn)移是其較難治愈的主要原因。腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子-2與Nck互作的絲氨酸蛋白激酶(TNIK)是一種多效能的腫瘤靶蛋白，在乳腺癌組織中異常高度表達(dá)，TNIK可參與激活Wnt/β-catenin通路，對(duì)于乳腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移至關(guān)重要。藥根堿屬于原小檗堿型異喹啉類生物堿，該類生物堿對(duì)多種癌細(xì)胞均具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性作用。通過(guò)藥物分子模擬對(duì)接顯示TNIK可能是藥根堿作用癌細(xì)胞的靶標(biāo)抑制蛋白。因此解析

2、TNIK調(diào)控乳腺癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，探尋抑制乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的靶向藥物，對(duì)于乳腺癌的治療具有重要的意義。
　　本研究利用基因編輯CRISPR/Cas9技術(shù)靶向敲除TNIK，建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的癌細(xì)胞株MDA-MB-231/TNIK-KO及MDA-MB-231/TNIK-Control，通過(guò)免疫熒光及免疫印跡檢測(cè)TNIK敲除后癌細(xì)胞內(nèi)TNIK、p-TNIK及Wnt/β-catenin通路關(guān)鍵蛋白表達(dá)情況，從而證明敲除TNIK可調(diào)控Wnt/β-

3、catenin通路關(guān)鍵蛋白表達(dá)及逆轉(zhuǎn)上皮，間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)，影響癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移侵襲能力，且其效果可通過(guò)加入藥根堿處理加強(qiáng)。同同時(shí)藥根堿可顯著抑制敲除細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡。MTT、流式、免疫熒光及Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明藥根堿對(duì)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231及MCF-7具有明顯的毒性作用，能夠抑制其生長(zhǎng)，調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)周期，誘導(dǎo)細(xì)胞線粒體膜電位發(fā)生改變，從而發(fā)生早期凋亡。再通過(guò)克隆形成、劃痕愈合、免疫熒光及West

4、ern Blot實(shí)驗(yàn)證明藥根堿能夠破壞細(xì)胞膜骨架蛋白F-actin，調(diào)控TNIK蛋白表達(dá)破壞乳腺癌細(xì)胞的完整性，從而降低癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)遷移能力。對(duì)于Wnt信號(hào)通路，藥根堿能夠調(diào)控關(guān)鍵蛋白β-catenin的表達(dá)使其下調(diào)，上調(diào)表達(dá)GSK-3β蛋白，并調(diào)控EMT上皮樣E-cadherin蛋白表達(dá)顯著增加，而間質(zhì)樣N-cadherin蛋白表達(dá)呈降低趨勢(shì)，從而逆轉(zhuǎn)EMT。此外，藥根堿還能夠逆轉(zhuǎn)MCF-7/DOX細(xì)胞對(duì)化療藥物阿霉素的耐藥性，并調(diào)控

5、相關(guān)ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的轉(zhuǎn)錄。以上結(jié)果在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中得到進(jìn)一步證實(shí)，藥根堿能夠明顯抑制乳腺腫瘤組織的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，且對(duì)荷瘤小鼠無(wú)明顯毒性。
　　綜上所述，藥根堿對(duì)乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖都具有顯著的調(diào)節(jié)作用，可以改變細(xì)胞遷移能力，阻滯細(xì)胞周期，最終引發(fā)細(xì)胞凋亡。而且藥根堿能夠靶向腫瘤蛋白TNIK，調(diào)控Wnt/β-catenin通路相關(guān)蛋白表達(dá)，進(jìn)一步逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生EMT。本課題的研究，可以為藥根堿的抗腫瘤活性及抑制轉(zhuǎn)移潛能相關(guān)研究提供