家蠶生殖發(fā)育相關(guān)基因Bmvlg、Bmachi的研究.pdf

1、生殖細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)育是有性生殖動(dòng)物胚胎發(fā)育中重要事件，在生物體發(fā)育進(jìn)程中占有極其重要的地位。 果蠅vasa基因編碼極質(zhì)中重要的蛋白質(zhì)成分，已知vasa基因變異，胚胎將不能形成生殖細(xì)胞。VASA蛋白作為生殖細(xì)胞的分子標(biāo)記，特異性地存在于果蠅的生殖腺中。果蠅achi和vis編碼高度相關(guān)的TGIF類似同源結(jié)構(gòu)域蛋白，兩者同時(shí)缺失的果蠅突變株中，雄性果蠅無精子發(fā)生分化信號，因而被認(rèn)為是一種雄性減數(shù)分裂阻滯基因。 家蠶是鱗翅目昆蟲

2、的模式種，為了探討家蠶生殖發(fā)育的分子機(jī)制，克隆了Bmvlg(Bombyx mori vasa-like gene)基因啟動(dòng)子，構(gòu)建了由Bmvlg啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)報(bào)告基因DsRed的瞬時(shí)表達(dá)載體，研究結(jié)果顯示，Bmvlg啟動(dòng)子可以驅(qū)動(dòng)DsRed在卵巢來源的BmN細(xì)胞和受精卵中瞬時(shí)表達(dá)；通過RT-PCR獲得了Bmvlg基因由不同剪接產(chǎn)生的4個(gè)cDNA序列，推測Bmvlg基因可能存在著多種可變剪接；通過RT-PCR克隆了家蠶achi(Bmachi)

3、 cDNA基因，結(jié)果顯示，Bmachi在家蠶雌雄性腺組織中均有表達(dá)，但雌雄之間存在不同于果蠅的剪接方式，且其豐度在雌雄間也存在差異；通過大腸桿菌成功表達(dá)了BmAchi，重組表達(dá)產(chǎn)物免疫小鼠制備了多抗，western blotting結(jié)果表明制備的抗體具有特異性；設(shè)計(jì)并合成Aehi-dsRNA，用RNAi初步研究了Bmachi基因的功能，結(jié)果顯示，3-4齡幼蟲期間注射Achi-siRNA-2( TCGCGTCGCTAACAGACAA)或