Survivin相關(guān)凋亡因子在狼瘡性腎炎的發(fā)生發(fā)展中的作用.pdf

1、研究背景： 狼瘡性腎炎(Lupus nephritis)已成為我國最常見的繼發(fā)性腎炎，也是系統(tǒng)性紅斑性狼瘡(Systemic lupus erythematosus，SLE)的主要致死原因之一。狼瘡性腎炎根據(jù)國際腎臟病協(xié)會和腎臟病理學會(ISN／RPS)2003年狼瘡性腎炎分類標準可分為Ⅰ～Ⅵ型。從Ⅰ型的輕微病變型狼瘡性腎炎到Ⅵ型的進行性硬化型狼瘡性腎炎，反映了狼瘡性腎炎各種類型病變的特點，也可以認為狼瘡性腎炎發(fā)展的不同階段。

2、 細胞凋亡是指由細胞內(nèi)特定基因控制的程序性細胞主動死亡過程，細胞凋亡受抑會使細胞生存期延長，是狼瘡性腎炎發(fā)生、發(fā)展的重要機制之一。Survivin是1997年發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制蛋白家族成員，它特異性表達于胚胎發(fā)育組織及分化未成熟組織。體外研究顯示它能夠抑制細胞死亡的效應(yīng)蛋白Caspase-3、Caspase-7，能直接或間接地抑制Bax、Fas誘發(fā)的內(nèi)源性及外源性細胞凋亡，因此它可能在狼瘡性腎炎病變發(fā)展過程中起重要作用。然而，Surv

3、ivin是否參與狼瘡性腎炎發(fā)展及其與相關(guān)凋亡因子在狼瘡性腎炎中的意義及關(guān)系仍未闡明。 目的： 本實驗設(shè)計旨在探討Survivin是否參與狼瘡性腎炎發(fā)生發(fā)展，其在由輕微病變型狼瘡性。腎炎到進行性硬化型狼瘡性腎炎過程中的變化以及其在凋亡通路中與Caspase-3，Bax、Fas、Bcl-2等相關(guān)凋亡因子可能存在的關(guān)系，同時通過分析各凋亡因子與臨床病理因素之間的關(guān)系，以尋求可能影響狼瘡性腎炎發(fā)展及預后的相關(guān)因素。 材料

4、和方法： 收集2006年1月-2006年12月本教研室狼瘡性腎炎病例80例，常規(guī)石蠟切片作HE、PAS、MASSON、PASM染色，觀察病理形態(tài)；冰凍切片作免疫熒光IgG、IgA、IgM、C3、C1qIg、Fg，觀察免疫復合物沉積；電鏡檢查，進一步確定病變的特點。應(yīng)用免疫組織化學技術(shù)檢測Survivin、Caspase-3，Bax、Fas、Bcl-2等的表達，同時利用原位凋亡標記(TUNEL)的技術(shù)檢測不同類型的狼瘡性腎炎中發(fā)生

5、的凋亡。收集狼瘡性腎炎的腎臟穿刺新鮮標本25例，采用半定量RT-PCR技術(shù)檢測Survivin mRNA在不同類型狼瘡性腎炎組織中的表達。 結(jié)果： 1、80例狼瘡性腎炎的病理形態(tài)分類，Ⅰ型7例，Ⅱ型19例，Ⅲ型5例，Ⅳ型36例，Ⅴ型10例，Ⅵ型3例。 2、TUNEL結(jié)果顯示：在Ⅰ型輕微病變型和Ⅵ型硬化型的狼瘡性腎炎中。腎小球的凋亡足少見的。而Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型及Ⅴ型等增生性狼瘡性。腎炎的凋亡明顯增多。凋亡指數(shù)AI與

6、蛋白尿之間存在相關(guān)關(guān)系(r=0.312,P=0.005<0.05)，而與血尿的程度及活動度均無相關(guān)關(guān)系。 3、Survivin在Ⅰ型輕微病變型狼瘡性腎炎及Ⅵ型硬化型狼瘡性腎炎組織中的表達極為有限，而在Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型、Ⅴ型狼瘡性腎炎可見不同程度的Survivin表達。如Ⅲ型、Ⅳ型的剛性率為100％，Ⅱ型的陽性率為89.5％。Ⅰ型與Ⅲ型、Ⅳ型、Ⅴ型的表達存在顯著差異(P<0.05)。Ⅰ型與Ⅱ型、Ⅵ型狼瘡性腎炎的表達無顯著差異(P>

7、0.05)。Survivin的表達與活動度呈正相關(guān)(r=0.352,P=0.001<0.05)，隨組織活動度的增高，Survivin的表達也上升。Survivin的表達與蛋白尿、血尿無關(guān)。同時Pearson相關(guān)檢驗也未發(fā)現(xiàn)其與凋亡指數(shù)AI的相關(guān)性。 4、Caspase-3在Ⅰ型輕微病變型狼瘡性腎炎及Ⅵ型硬化型狼瘡性腎炎組織中的表達極為有限，而在Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型、Ⅴ型狼瘡性腎炎中的表達顯著增高，其陽性率均明顯高于Ⅰ型及Ⅵ型狼瘡性腎

8、炎。如在Ⅲ型、Ⅴ型狼瘡性腎炎Caspase-3表達的陽性率為100％，在Ⅳ型狼瘡性腎炎中表達的陽性率為97.2％。Caspase-3蛋白的表達與蛋白尿程度存在正相關(guān)(r=0.268,P=0.016<0.05)，蛋白尿越嚴重，Caspase-3蛋白的表達越強，而與活動度及凋亡指數(shù)AI存在正相關(guān)(r=0.269,P=0.016<0.05：r=0.230，P=0.040<0.05)。隨組織活動度和AI的增高，Caspase-3的表達也上升，與

9、血尿無明顯的關(guān)系。 5、Fas蛋白在Ⅰ型與Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型、Ⅴ型狼瘡性腎炎中的表達存在顯著差異(P<0.05)。而Ⅰ型與Ⅵ型狼瘡性腎炎的表達無顯著差異(P>0.05)。Fas的表達與活動度呈正相關(guān)(r=0.314,P=0.005<0.05)，隨組織活動度的增高，F(xiàn)as的表達也上升。Fas的表達與蛋白尿呈正相關(guān)(r=0.243,P=0.030<0.05)。蛋白尿越嚴重，F(xiàn)as的表達越強，而也未發(fā)現(xiàn)其與凋亡指數(shù)AI的相關(guān)性。

10、 6、Bax蛋白在Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型、Ⅴ型狼瘡性腎炎中的表達顯著增高，其陽性率均明顯高于Ⅰ型及Ⅵ型狼瘡性腎炎。如在Ⅲ型和Ⅴ型狼瘡性腎炎Bax表達的陽性率為100％，在Ⅳ型狼瘡性腎炎中表達的陽性率為94.4％。Bax的表達與蛋白尿、血尿及活動度間無明顯的相關(guān)性(P>0.05)，同時Pearson相關(guān)檢驗也未發(fā)現(xiàn)其與凋亡指數(shù)AI的相關(guān)性。 7、Bcl-2蛋白在Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型、Ⅴ型狼瘡性腎炎中的表達顯著增高，Bcl-2其陽性率均明顯高

11、于Ⅰ型及Ⅵ型狼瘡性腎炎。如在Ⅲ型和ⅢⅤ型狼瘡性腎炎表達的陽性率為100％，在Ⅳ型狼瘡性腎炎中表達的陽性率為97.2％。Bcl-2的表達與凋亡指數(shù)AI呈正相關(guān)(r=0.239,P=0.033<0.05)，隨凋亡指數(shù)AI增高，Bcl-2的表達也上升。Bcl-2的表達與蛋白尿、血尿無關(guān)。同時Pearson相關(guān)檢驗也未發(fā)現(xiàn)其與活動度的相關(guān)性。 8、RT-PCR結(jié)果顯示：Survivin mRNA在Ⅰ型與Ⅱ型、Ⅳ型中的表達差異具有統(tǒng)計學意

12、義(P<0.05)。 9、相關(guān)分析顯示：除了Survivin、Fas、Bax與凋亡指數(shù)之間無相關(guān)性(P>0.05)，其它因素兩倆之間均存在正相關(guān)(P<0.05)。 結(jié)論： 1、各型狼瘡性腎炎中以增生型為主的LN中細胞凋亡更顯著，凋亡指數(shù)比輕微病變型及硬化型高。這是一種增生型腎小球腎炎自我限制的細胞凋亡介導的調(diào)控過程，在一定程度上有利于腎小球維持其細胞量的平衡。 2、Survivin參與了狼瘡性腎炎的發(fā)生與