大鼠肝細胞中能與銅配合物結(jié)合的蛋白質(zhì)提取純化與鑒定.pdf

1、金屬配合物具有治療糖尿病、癌癥、阿爾茲海默癥等疾病的潛力，受到廣泛關(guān)注。早期研究金屬藥物的抗癌活性主要以DNA為靶點，隨著蛋白質(zhì)組學的發(fā)展，與重要疾病發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的蛋白質(zhì)作為靶標的金屬藥物研究越來越受到人們的重視。
　　 最近研究表明銅配合物可以通過抑制蛋白體的胰凝乳蛋白酶樣活性、蛋白酪氨酸磷酸酶活性等抑制癌細胞生長，還能減少β淀粉樣蛋白的生成具有治療阿爾茲海默癥的潛力。那么銅配合物到底能與體內(nèi)多少種蛋白結(jié)合并影響生理作用

2、呢？本論初步提取、純化與鑒定了大鼠肝細胞中能與銅配合物結(jié)合的蛋白質(zhì)，以及初步研究純化蛋白質(zhì)與不同結(jié)構(gòu)銅配合物的結(jié)合作用，尋找銅配合物的蛋白質(zhì)靶標。具體工作及成果如下:
　　 1.采用原位消化法、Percoll單密度梯度離心法及糖原染色法從大白鼠肝臟中提取并且純化肝細胞，得到的肝細胞純度達到95％以上。
　　 2.通過銅離子親和層析、聚丙烯酰胺凝膠電泳等初步提取鑒定大鼠肝臟細胞中97種能與銅配合物結(jié)合的蛋白質(zhì)，及其蛋白質(zhì)的

3、種類、分子質(zhì)量以及在樣品中的含量。并且通過陰陽離子交換柱分離、純化了其中3種蛋白質(zhì)，即過氧化氫酶(ProteinA)、待定蛋白(ProteinB)和鳥氨酸氨甲?；D(zhuǎn)移酶(ProteinC)。
　　 3.通過熒光光譜初步研究了純化蛋白質(zhì)過氧化氫酶(ProteinA)和另一種純化蛋白質(zhì)(ProteinB)與13個不同結(jié)構(gòu)的銅配合物的結(jié)合作用。實驗結(jié)果顯示:13個銅配合物對兩種蛋白質(zhì)的熒光猝滅是靜態(tài)猝滅過程，其結(jié)合比是1∶1，不同結(jié)構(gòu)