鹿茸補(bǔ)腎湯及其多肽對干細(xì)胞成骨活性的影響——以靶向調(diào)控TGF-β-Smads信號通路對脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的影響為例.pdf

1、鹿茸作為名貴中藥具有多種藥理活性，在疾病治療中應(yīng)用廣泛。鹿茸補(bǔ)腎湯具有補(bǔ)腎陽、強(qiáng)筋骨等功效。其君藥鹿茸中提取的32肽對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）有明顯的促增殖和誘導(dǎo)分化活性，而脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（Adipose tissue-derived stem cells, ADSCs）與MSCs均來自于胚胎中胚層，亦在骨損傷修復(fù)和抗腫瘤研究中備受關(guān)注。
　　本實(shí)驗(yàn)觀察鹿茸補(bǔ)腎湯及鹿茸32肽對小

2、鼠ADSCs和人腎上皮細(xì)胞（293T）增殖、遷移及黏附性的影響，進(jìn)而研究鹿茸32肽對小鼠ADSCs向成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響以及轉(zhuǎn)化過程中TGF-β1、ALP、Smad1、Smad2、Smad3表達(dá)量的變化。MTT實(shí)驗(yàn)表明，鹿茸補(bǔ)腎湯凍干粉及其多肽對ADSCs促增殖作用明顯，鹿茸補(bǔ)腎湯凍干粉對293T促增殖作用不顯著，鹿茸多肽對293T促增殖作用明顯。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)表明，鹿茸補(bǔ)腎湯凍干粉作用的ADSCs及293T劃痕寬度大于對照組，鹿茸多肽濃度

3、為1ug/ml時(shí)，ADSCs及293T細(xì)胞劃痕寬度小于對照組，50ug/ml及5ug/ml時(shí)劃痕寬度大于對照組。胰蛋白酶消化實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)隨著鹿茸補(bǔ)腎湯凍干粉及其多肽濃度的升高，ADSCs細(xì)胞消化時(shí)間顯著縮短。礦化實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)組鈣結(jié)節(jié)數(shù)量多于對照組，并且在轉(zhuǎn)化過程中，TGF-β1、Smad2及Smad3表達(dá)量升高，Smad1及ALP表達(dá)量降低。
　　本研究揭示鹿茸補(bǔ)腎湯凍干粉可促進(jìn)ADSCs增殖，抑制其遷移，降低細(xì)胞黏附力，抑制293T增

4、殖及遷移。鹿茸多肽可促進(jìn)293T增殖，促進(jìn)小鼠ADSCs增殖并且降低細(xì)胞黏附力。對于兩種細(xì)胞，低濃度多肽可促進(jìn)細(xì)胞遷移，高濃度則抑制。鹿茸多肽可以促進(jìn)ADSCs向成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化，并促進(jìn)轉(zhuǎn)化過程中TGF-β1、Smad2及Smad3的表達(dá)，抑制Smad1及ALP的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)表明鹿茸多肽作用效果優(yōu)于鹿茸補(bǔ)腎湯，可用于促進(jìn)細(xì)胞增殖，降低其在特定區(qū)域的黏附，同時(shí)為促進(jìn)其向受損部位轉(zhuǎn)移提供了可能。在此實(shí)驗(yàn)過程中初步探討了靶向作用于TGF-β信號通路