多粘菌素E聯(lián)合左氧氟沙星對MDR-AB防耐藥突變研究.pdf

1、第一部分多粘菌素E聯(lián)合左氧氟沙星對MDR-AB防耐藥突變研究
　　 目的:(1)獲得近期臨床收集多藥耐藥鮑曼不動桿菌(multi-drug resistantAcinetobacter baumannii,MDR-AB)對10種抗菌藥物的藥敏(Minimum inhibitoryconcentration,MIC)信息;(2)通過克隆型分類篩選出代表性試驗(yàn)菌株;(3)基于耐藥突變選擇窗(mutant selection wind

2、ow,MSW)理論,測定多粘菌素E(colistin)單用藥組和聯(lián)合用藥組對鮑曼不動桿菌的聯(lián)合MIC和防耐藥突變濃度(mutantprevention concentration,MPC);(4)建立在肉湯中運(yùn)用同時(shí)測定colistin和左氧氟沙星(levofloxacin)濃度方法學(xué);(5)構(gòu)建模擬體內(nèi)PK/PD模型,結(jié)合體外研究,綜合評價(jià)colistin聯(lián)合levofloxacin對MDR-AB的防耐藥突變能力。
　　 方法

3、:(1)通過采用瓊脂平板稀釋法和微量肉湯稀釋法分別對10種抗菌藥物進(jìn)行MIC測定;(2)采用分子流行病學(xué)上分類方法“金標(biāo)準(zhǔn)”—脈沖場凝膠電泳方法(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)測得73株鮑曼不動桿菌PFGE克隆型;(3)應(yīng)用96孔平板棋盤法設(shè)計(jì)測定colistin與其它抗菌藥物的聯(lián)合MIC,在此基礎(chǔ)上,測定聯(lián)合用藥組及單用藥組的MPC與聯(lián)合MPC;(4)運(yùn)用固相萃取(SPE)方法對含藥肉湯進(jìn)

4、行處理,通過液質(zhì)聯(lián)用(HPLC-MS/MS)建立同時(shí)測定colistin和levofloxacin濃度方法學(xué);(5)以蠕動泵構(gòu)建模擬體內(nèi)PK/PD模型,參考模擬臨床用藥后,菌落計(jì)數(shù)及各時(shí)間點(diǎn)菌落MIC重復(fù)測定等綜合評價(jià)聯(lián)合用藥后效果。
　　 結(jié)果:73株鮑曼不動桿菌經(jīng)MIC測定確證為多藥耐藥菌株,其中泛耐藥菌株比例占27.4％。所測菌株對目前臨床常用的頭孢菌素類、碳青霉烯類、氟喹諾酮類、氨基糖苷類和β-內(nèi)酰胺酶抑制劑類敏感率均不

5、高,但colistin的敏感率非常高,僅有一株表現(xiàn)出耐藥,與07年研究數(shù)據(jù)比較,levofloxacin的耐藥率由90.3%下降至36.5%,趨勢明顯。PFGE將73株菌分為6個(gè)克隆型,主要有A型和D型,其中D型菌株對levofloxacin敏感率較高。Colistin與levofloxacin聯(lián)用,聯(lián)合抑菌分?jǐn)?shù)(FIC)值對代表性菌株AB19顯示低于0.5,對AB34和AB42的值分別為0.6和0.75,接近于0.5,MPC結(jié)果顯示兩

6、藥聯(lián)合后,選擇指數(shù)(SI)下降了4-8倍。應(yīng)用HPLC-MS/MS方法構(gòu)建肉湯中同時(shí)測定colistin和levofloxacin濃度方法學(xué),日內(nèi)準(zhǔn)確度范圍在86.10%～111.05%,日間準(zhǔn)確度范圍在85.97%～115.70%,日內(nèi)精密度(RSD)≤6.83%,日間精密度(RSD)≤9.85%,滿足測定要求。構(gòu)建蠕動泵模型,模擬半衰期4h,每24小時(shí)給藥2次,參考臨床給藥劑量,初始濃度達(dá)4.51μg/mL,不同時(shí)間點(diǎn)菌落計(jì)數(shù)顯示給

7、藥后第一個(gè)半衰期即下降至最低,colistin單用藥組菌量數(shù)量級降至107以下,聯(lián)用后,AB19細(xì)菌生長較單用藥組在24h、48h維持在更低的水平,菌量相差1-2倍log10CFU/mL。但AB34和AB42顯示兩組無明顯差別。復(fù)測各時(shí)間點(diǎn)所取菌株MIC,AB19單用colistin時(shí)在48h即有升高,聯(lián)用levofloxacin后48h未見MIC發(fā)生變化。AB34號菌株未篩選出異質(zhì)性耐藥株。AB42聯(lián)用藥時(shí)MIC無變化,而多粘菌素E單

8、用時(shí)24h即出現(xiàn)了MIC升高的現(xiàn)象。
　　 結(jié)論:體外研究表明,colistin對鮑曼不動桿菌的敏感率高,作用迅速,但單用藥時(shí),易出現(xiàn)異質(zhì)性耐藥菌株選擇性擴(kuò)增的現(xiàn)象。左氧氟沙星對該地區(qū)鮑曼不動桿菌的耐藥率呈下降趨勢,兩藥體外聯(lián)合呈現(xiàn)一定的協(xié)同療效,在防耐藥突變能力上也有不同程度的加強(qiáng),但研究結(jié)果也表明現(xiàn)有臨床給藥劑量和方案需要進(jìn)一步優(yōu)化,本課題研究為進(jìn)一步的體內(nèi)研究提供了豐富的基礎(chǔ)數(shù)據(jù),為臨床應(yīng)用提供了有價(jià)值的參考。
　　

9、 第二部分臨床藥學(xué)實(shí)踐
　　 目的:通過在臨床藥學(xué)各部門實(shí)踐,了解并掌握醫(yī)院藥學(xué)工作要求的各項(xiàng)技能,學(xué)習(xí)并參與到臨床工作中,促進(jìn)合理用藥;結(jié)合專業(yè)知識對一項(xiàng)熱點(diǎn)問題進(jìn)行跟蹤研究;掌握血藥濃度監(jiān)測常用方法;通過藥品臨床試驗(yàn)管理規(guī)范(Goodclinical practice,GCP)培訓(xùn),系統(tǒng)學(xué)習(xí)并參與藥物臨床試驗(yàn)研究,熟悉標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(Standard Operation Procedure,SOP)及相關(guān)法律法規(guī)。
　

10、　 方法:參與部分臨床會診工作,利用文獻(xiàn)檢索等工具對疑難問題查證分析;對熱點(diǎn)研究課題NDM-1運(yùn)用文獻(xiàn)計(jì)量學(xué)分析方法進(jìn)行跟蹤研究;采用HPLC、TDX、ELISA等儀器進(jìn)行常規(guī)血藥濃度監(jiān)測;參加SFDA舉辦的GCP系統(tǒng)培訓(xùn)和考試,參與藥物臨床試驗(yàn)2項(xiàng):注射用頭孢拉宗鈉在中國健康受試者單次靜脈滴注藥代動力學(xué)研究和單次靜滴硫酸頭孢噻利血清殺菌效價(jià)及藥代動力學(xué)試驗(yàn)研究。結(jié)果:運(yùn)用專業(yè)知識和技能解決臨床上的一些問題,如查證美羅培南對丙戊酸的影